Evidence for recycling of external guide sequences during cleavage of bipartite substrates in vitro by reconstituted archaeal RNase P.
Evidence for recycling of external guide sequences during cleavage of bipartite substrates in vitro by reconstituted archaeal RNase P.
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重组古菌 RNase P 体外切割二分底物过程中外部引导序列循环利用的证据。
DOI：
10.1016/j.jmb.2010.11.056
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发表时间：
2011
影响因子：
5.6
通讯作者：
Gopalan,Venkat
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cho,I-Ming;Kazakov,SergeiA;Gopalan,Venkat
RNA介导的RNA裂解事件越来越多地被用来破坏RNA功能，这是后基因组生物学的一个重要目标。RNaseP是一种核糖核蛋白酶，催化从前体tRNAs中去除5‘-前导，以前曾被用来对细胞RNA进行序列特异性切割。在细菌和哺乳动物细胞培养中证实的其中一种策略中，与目标RNA碱基配对的外部引导序列(EGS)RNA通过使两部分目标RNA-EGS复合体成为前体tRNA结构模拟物，使后者成为内源RNaseP的底物。在本研究中，我们首次获得了四种不同的中温和嗜热古生菌RNaseP全酶在体外利用它们各自的组成RNA和蛋白质亚基重组的证据，识别和切割这种底物-EGS复合体。我们进一步证明，这些EGs参与了多轮底物识别，同时帮助古生菌RNaseP在体外切割目标RNA。综上所述，基于EGS的方法值得考虑作为古生菌中的基因敲除工具。
RNA-mediated RNA cleavage events are being increasingly exploited to disrupt RNA function, an important objective in post-genomic biology. RNase P, a ribonucleoprotein enzyme that catalyzes the removal of 5′-leaders from precursor tRNAs, has previously been utilized for sequence-specific cleavage of cellular RNAs. In one of these strategies, borne out in bacterial and mammalian cell culture, an external guide sequence (EGS) RNA base-paired to a target RNA makes the latter a substrate for endogenous RNase P by rendering the bipartite target RNA–EGS complex a precursor tRNA structural mimic. In this study, we first obtained evidence that four different mesophilic and thermophilic archaeal RNase P holoenzymes, reconstituted in vitro using their respective constituent RNA and protein subunits, recognize and cleave such substrate–EGS complexes. We further demonstrate that these EGSs engage in multiple rounds of substrate recognition while assisting archaeal RNase P-mediated cleavage of a target RNA in vitro. Taken together, the EGS-based approach merits consideration as a gene knockdown tool in archaea.
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DOI：
--
发表时间：
1969
期刊：
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影响因子：
--
作者：
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通讯作者：
G. Matrone
DOI：
--
发表时间：
1982
期刊：
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影响因子：
--
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通讯作者：
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通讯作者：
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