Interaction of the Second Binding Region of Troponin I with the Regulatory Domain of Skeletal Muscle Troponin C as Determined by NMR Spectroscopy*
Interaction of the Second Binding Region of Troponin I with the Regulatory Domain of Skeletal Muscle Troponin C as Determined by NMR Spectroscopy*
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通过 NMR 波谱测定肌钙蛋白 I 第二结合区与骨骼肌肌钙蛋白 C 调节域的相互作用*
DOI：
10.1074/jbc.272.45.28494
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发表时间：
1997
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
B. Sykes
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
R. McKay;B. Tripet;R. Hodges;B. Sykes
应用二维1H，15 N-杂单量子相关NMR技术研究了钙饱和肌钙蛋白C（N-TnC）的15 N-标记调节结构域中的酰胺基在加入人工合成的N-乙酰肌钙蛋白I 115-131-酰胺肽（TnI 115 -131）后的共振频率变化。利用酰胺化学位移的变化，测得低盐和100 mm KCl样品中TnI 115 -131与N-TnC 1：1结合的解离常数分别为28 ± 4和24 ± 4 μm。根据观察到的N-TnC骨架酰胺1H，15 N-杂环单量子相关交叉峰线宽，确定TnI 115 -131的解离速率为300 s-1，其与钙解离速率相当（Li，M. X.，Gagné，S. M.，Tsuda，S.，凯角，澳-地M.，斯迈利湖B.，和Sykes，B. D.（1995）Biochemistry 34，8330-8340），并且与肌肉收缩的生物调节的动力学预期一致。通过将化学位移变化映射到N-TnC NMR结构上来确定N-TnC上的TnI 115 -131结合位点，并证明其位于“疏水口袋”中（Gagne '，S. M.，Tsuda，S.，Li，M. X.，斯迈利湖B.，和Sykes，B. D.（1995）Nat.Struct.Biol.2，784-789）。
Two dimensional1H,15N-heteronuclear single quantum correlation NMR was used to monitor the resonance frequency changes of the backbone amide groups belonging to the 15N-labeled regulatory domain of calcium saturated troponin C (N-TnC) upon addition of synthetic skeletal N-acetyl-troponin I 115–131-amide peptide (TnI115–131). Utilizing the change in amide chemical shifts, the dissociation constant for 1:1 binding of TnI115–131 to N-TnC in low salt and 100 mm KCl samples was determined to be 28 ± 4 and 24 ± 4 μm, respectively. The off rate of TnI115–131 was determined to be 300 s−1 from observed N-TnC backbone amide1H,15N-heteronuclear single quantum correlation cross-peak line widths, which is on the order of the calcium off rates (Li, M. X., Gagné, S. M., Tsuda, S., Kay, C. M., Smillie, L. B., and Sykes, B. D. (1995) Biochemistry34, 8330–8340), and agrees with kinetic expectations for biological regulation of muscle contraction. The TnI115–131 binding site on N-TnC was determined by mapping of chemical shift changes onto the N-TnC NMR structure and was demonstrated to be in the “hydrophobic pocket” (Gagné, S. M., Tsuda, S., Li, M. X., Smillie, L. B., and Sykes, B. D. (1995) Nat. Struct. Biol. 2, 784–789).
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