Sensitive quantitative detection of SARS-CoV-2 in clinical samples using digital warm-start CRISPR assay.
Sensitive quantitative detection of SARS-CoV-2 in clinical samples using digital warm-start CRISPR assay.
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DOI：
10.1016/j.bios.2021.113218
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发表时间：
2021-07-15
影响因子：
12.6
通讯作者：
Liu C
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Ding X;Yin K;Li Z;Sfeir MM;Liu C
量化临床样本中的严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）对于2019年冠状病毒病的早期诊断和及时治疗至关重要。在这里，我们描述了一种数字化热启动CRISPR（dWS-CRISPR）检测方法，用于灵敏地定量检测临床样本中的SARS-CoV-2。dWS-CRISPR检测在高于50 °C的温度下启动，克服了室温下不期望的过早靶扩增，从而实现了SARS-CoV-2的准确和可靠的数字定量。通过靶向SARS-CoV-2的核蛋白基因，dWS-CRISPR检测能够检测芯片中低至5拷贝/μl的SARS-CoV-2 RNA。通过对32份临床拭子样本和3份临床唾液样本的定量测定，进行了临床验证。此外，它已被证明可以直接检测热处理唾液样本中的SARS-CoV-2，而无需提取RNA。因此，dWS-CRISPR方法作为一种灵敏可靠的CRISPR检测方法，有助于准确检测SARS-CoV-2，实现数字化定量。数字化热启动CRISPR（dWS-CRISPR）检测试剂盒用于临床样本中SARS-CoV-2的灵敏定量检测。
Quantifying severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) in clinical samples is crucial for early diagnosis and timely medical treatment of coronavirus disease 2019. Here, we describe a digital warm-start CRISPR (dWS-CRISPR) assay for sensitive quantitative detection of SARS-CoV-2 in clinical samples. The dWS-CRISPR assay is initiated at above 50 °C and overcomes undesired premature target amplification at room temperature, enabling accurate and reliable digital quantification of SARS-CoV-2. By targeting SARS-CoV-2's nucleoprotein gene, the dWS-CRISPR assay is able to detect down to 5 copies/μl SARS-CoV-2 RNA in the chip. It is clinically validated by quantitatively determining 32 clinical swab samples and three clinical saliva samples. Moreover, it has been demonstrated to directly detect SARS-CoV-2 in heat-treated saliva samples without RNA extraction. Thus, the dWS-CRISPR method, as a sensitive and reliable CRISPR assay, facilitates accurate SARS-CoV-2 detection toward digitized quantification. A digital warm-start CRISPR (dWS-CRISPR) assay for sensitive, quantitative detection of SARS-CoV-2 in clinical samples.
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DOI：
10.1126/science.aaf5573
发表时间：
2016-08-05
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Abudayyeh OO;Gootenberg JS;Konermann S;Joung J;Slaymaker IM;Cox DB;Shmakov S;Makarova KS;Semenova E;Minakhin L;Severinov K;Regev A;Lander ES;Koonin EV;Zhang F
通讯作者：
Zhang F
影响因子：
16.6
作者：
Ding X;Yin K;Li Z;Lalla RV;Ballesteros E;Sfeir MM;Liu C
通讯作者：
Liu C
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
7.4
作者：
Cai, Sheng;Jung, Cheulhee;Ellington, Andrew D.
通讯作者：
Ellington, Andrew D.
影响因子：
9.3
作者：
Behrmann, Ole;Bachmann, Iris;Hufert, Frank T.
通讯作者：
Hufert, Frank T.