FhuA interactions in a detergent-free nanodisc environment.
FhuA interactions in a detergent-free nanodisc environment.
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FhuA 在无去污剂的纳米盘环境中相互作用。
DOI：
10.1016/j.bbamem.2013.09.022
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发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
F. Duong
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Allan Mills;Hai;J. Coulton;F. Duong
细菌的 TonB 依赖性膜受体已在含有去污剂的溶液中进行了分析，这种环境可能会影响配体在诱导下游相互作用中的作用。我们报告将 FhuA 重构为膜模拟物：纳米圆盘。与之前在洗涤剂中的结果相反，我们发现纳米圆盘中 TonB 与 FhuA 的结合强烈依赖于铁红素。相互作用的化学计量为 1:1，结合常数 KDis ~ 200 nM；平衡亲和力比洗涤剂中报道的低十倍。纳米圆盘中的 FhuA 还形成大肠菌素 M (KD~ 3.5 nM) 的高亲和力结合位点，而铁红素使 FhuA 难以与大肠菌素结合。总之，这些结果证明了配体在调节受体相互作用中的重要性以及纳米圆盘在膜样环境中研究 β-桶膜蛋白的优势。
TonB-dependent membrane receptors from bacteria have been analyzed in detergent-containing solution, an environment that may influence the role of ligand in inducing downstream interactions. We report reconstitution of FhuA into a membrane mimetic: nanodiscs. In contrast to previous results in detergent, we show that binding of TonB to FhuA in nanodiscs depends strongly on ferricrocin. The stoichiometry of interaction is 1:1 and the binding constant KDis ~ 200 nM; an equilibrium affinity that is ten-fold lower than reported in detergent. FhuA in nanodiscs also forms a high-affinity binding site for colicin M (KD~ 3.5 nM), while ferricrocin renders FhuA refractory to colicin binding. Together, these results demonstrate the importance of the ligand in regulating receptor interactions and the advantages of nanodiscs to study β-barrel membrane proteins in a membrane-like environment.
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