Comprehensive assessment of NR ligand polypharmacology by a multiplex reporter NR assay.
Comprehensive assessment of NR ligand polypharmacology by a multiplex reporter NR assay.
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DOI：
10.1038/s41598-022-07031-8
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发表时间：
2022-02-24
影响因子：
4.6
通讯作者：
Makarov SS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Medvedev A;Moeser M;Medvedeva L;Martsen E;Granick A;Raines L;Gorman K;Lin B;Zeng M;Houck KA;Makarov SS
核受体(NR)是配体调节的转录因子，调节多种细胞功能，是良好的药物靶点。然而，由于NR结构上的同源性，NR配体经常与多个受体相互作用。在这里，我们描述了一种多重报告分析(因子NR)，它能够并行评估所有48个人类NR的NR配体活性。该检测方法包括瞬时导入测试细胞的单杂交GAL4-NR报告模块。为了评估记者的活性，我们评估了他们的RNA转录本。我们使用了均相RNA检测方法，该方法提供了相同的检测效率，并允许在单孔式中进行多重检测。为了验证，我们检查了一组选择性的NR配体和孕激素、雌激素、PPAR、ERR和ROR受体的多药激动剂和拮抗剂。该测定产生了高度重复性的NR活性谱(r >； 0.96)，从而允许对个体的NR反应进行定量评估。推断的EC50值与已发表的数据相吻合。该方法质量优良(<；Z‘>； = 为0.73)，变异系数低(<；CV>； = 为7.2%)。此外，该方法还允许区分对配体的直接和非直接NR反应。因此，因子NR能够对NR配体的多药理作用进行综合评价。
Nuclear receptors (NR) are ligand-modulated transcription factors that regulate multiple cell functions and thus represent excellent drug targets. However, due to a considerable NR structural homology, NR ligands often interact with multiple receptors. Here, we describe a multiplex reporter assay (the FACTORIAL NR) that enables parallel assessment of NR ligand activity across all 48 human NRs. The assay comprises one-hybrid GAL4-NR reporter modules transiently transfected into test cells. To evaluate the reporter activity, we assessed their RNA transcripts. We used a homogeneous RNA detection approach that afforded equal detection efficacy and permitted the multiplex detection in a single-well format. For validation, we examined a panel of selective NR ligands and polypharmacological agonists and antagonists of the progestin, estrogen, PPAR, ERR, and ROR receptors. The assay produced highly reproducible NR activity profiles (r > 0.96) permitting quantitative assessment of individual NR responses. The inferred EC50 values agreed with the published data. The assay showed excellent quality (<Z’> = 0.73) and low variability (<CV> = 7.2%). Furthermore, the assay permitted distinguishing direct and non-direct NR responses to ligands. Therefore, the FACTORIAL NR enables comprehensive evaluation of NR ligand polypharmacology.
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