A contraceptive peptide vaccine targeting sulfated glycoprotein ZP2 of the mouse zona pellucida.
A contraceptive peptide vaccine targeting sulfated glycoprotein ZP2 of the mouse zona pellucida.
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一种针对小鼠透明带硫酸化糖蛋白 ZP2 的避孕肽疫苗。
DOI：
10.1095/biolreprod60.4.900
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发表时间：
1999
影响因子：
3.6
通讯作者：
Tung,KS
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sun,W;Lou,YH;Dean,J;Tung,KS
在这项研究中，我们已经映射和表征的B细胞表位的硫酸化糖蛋白ZP 2（ZP 2）作为一个多表位的透明质酸（ZP）疫苗的发展的一步。随机脱氧核糖核酸酶消化的片段ZP 2 cDNA表达的重组多肽进行筛选结合IE-3，鼠ZP 2的单克隆抗体。阳性克隆含有编码对应于ZP 2103 -134的多肽的cDNA插入片段。当用跨越ZP 2的该区域的三个重叠肽（101-120、111-130、121-140）免疫正常或卵巢切除的雌性小鼠时，仅ZP 2121 - 140引发与小鼠卵巢ZP反应的IgG抗体，表明ZP 2121 -140中存在天然B表位和辅助T细胞表位。为了更精细地定位ZP 2 B细胞表位，用IE-3抗体筛选随机肽展示文库，并定位与ZP 2123 - 126序列VRYK匹配的共有四聚体序列VRYK。竞争性免疫荧光分析表明，三个关键的B细胞表位残基的相对贡献为Y > V > K。构建了含有ZP 2的YRYK基序和牛RNase T细胞表位的嵌合肽。尽管用嵌合肽免疫（C57 BL/6×A/J）F1（B6 AF 1）雌性小鼠产生ZP抗体应答，但该肽仅在组织相容性复合物（MHC）H-2k或b单倍型小鼠中引发抗体。相反，ZP 2121 - 140肽在具有另外三种小鼠MHC单倍型的近交系小鼠中引发抗体。此外，尽管ZP 2121 - 140含有T细胞表位，但用完全弗氏佐剂（CFA）中的ZP 2121 - 140免疫B6 AF 1小鼠后未观察到卵巢炎。在初步试验中，与单独注射CFA的小鼠相比，用CFA中的ZP 2121 - 140免疫的雌性B6 AF 1小鼠的窝仔数减少。
In this study, we have mapped and characterized a B cell epitope of sulfated glycoprotein ZP2 (ZP2) as a step toward the development of a multi-epitope zona pellucida (ZP) vaccine. Recombinant polypeptides expressed by random deoxyribonuclease-digested fragments of ZP2 cDNA were screened for binding to IE-3, a monoclonal antibody to murine ZP2. Positive clones contained cDNA inserts encoding polypeptide corresponding to ZP2103–134. When normal or ovariectomized female mice were immunized with three overlapping peptides that span this region of ZP2 (101–120, 111–130, 121–140), only ZP2121–140elicited IgG antibodies that reacted with mouse ovarian ZP, indicative of the presence of native B epitope and helper T cell epitope in ZP2121–140. To more finely map the ZP2 B cell epitope, a random peptide display library was screened with the IE-3 antibody, and a consensus tetramer sequence VxYK that matched the ZP2123–126sequence VRYK was located. Competitive immunofluorescence analysis with single alanine-substituted VxYK peptides ranked the relative contribution of the three critical B cell epitope residues as Y > V > K. A chimeric peptide was constructed that contained the YRYK motif of ZP2 and a bovine RNase T cell epitope. Although (C57BL/6×A/J) F1 (B6AF1) female mice immunized with the chimeric peptide developed ZP antibody response, this peptide elicited antibody only in mice of the histocompatibility complex (MHC) H-2k or bhaplotype. In contrast, ZP2121–140peptide elicited antibody in inbred mice with three additional mouse MHC haplotypes. Moreover, although ZP2121–140contained a T cell epitope, no oophoritis was observed after immunization of B6AF1 mice with ZP2121–140in complete Freund's adjuvant (CFA). In a preliminary trial, female B6AF1 mice immunized with ZP2121–140in CFA had reduced litter sizes as compared with mice injected with CFA alone.
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DOI：
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发表时间：
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