Homogeneous antibody fragment conjugation by disulfide bridging introduces 'spinostics'.
Homogeneous antibody fragment conjugation by disulfide bridging introduces 'spinostics'.
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DOI：
10.1038/srep01525
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发表时间：
2013
影响因子：
4.6
通讯作者：
Baker, James R.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schumacher, Felix F.;Sanchania, Vishal A.;Tolner, Berend;Wright, Zoe V. F.;Ryan, Chris P.;Smith, Mark E. B.;Ward, John M.;Caddick, Stephen;Kay, Christopher W. M.;Aeppli, Gabriel;Chester, Kerry A.;Baker, James R.
有效生产用于治疗和诊断的抗体结合物的一个主要障碍是常用的将效应分子附着到目标抗体上的化学方法的性能不理想。在这里，我们证明，这一限制可以简单地解决使用3，4-取代马来酰亚胺桥联，从而官能化二硫键，以产生均一抗体结合物。这种一步偶联反应快速、定点、定量，生成的产物具有完全结合活性、良好的血浆稳定性和所需的功能性质。此外，这种通过二硫键桥联修饰的刚性使我们能够通过连续波电子顺磁共振(CW-EPR)成功地检测到带有自旋标记抗体片段的抗原，这是我们在这里首次报道的。抗原检测依赖于浓度，在人体血液中可观察到，并允许区分不同结合亲和力的片段。我们展望了基于抗体的溶液中诊断方法的广阔潜力，这种方法可以通过EPR或‘Spinostics’来实现。
A major obstacle to the efficient production of antibody conjugates for therapy and diagnosis is the non-ideal performance of commonly used chemical methods for the attachment of effector-molecules to the antibody of interest. Here we demonstrate that this limitation can be simply addressed using 3,4-substituted maleimides to bridge and thus functionalize disulfide bonds to generate homogeneous antibody conjugates. This one-step conjugation reaction is fast, site-specific, quantitative and generates products with full binding activity, good plasma stability and the desired functional properties. Furthermore, the rigid nature of this modification by disulfide bridging enables the successful detection of antigen with a spin labeled antibody fragment by continuous-wave electron paramagnetic resonance (cw-EPR), which we report here for the first time. Antigen detection is concentration dependent, observable in human blood and allows the discrimination of fragments with different binding affinity. We envisage broad potential for antibody based in-solution diagnostic methods by EPR or ‘spinostics'.
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影响因子：
3.2
作者：
Moody, Paul;Smith, Mark E. B.;Ryan, Chris P.;Chudasama, Vijay;Baker, James R.;Molloy, Justin;Caddick, Stephen
通讯作者：
Caddick, Stephen
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作者：
Saphier, O;Silberstein, T;Meyerstein, N
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Meyerstein, N
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作者：
Mitchell, Deborah G.;Quine, Richard W.;Eaton, Gareth R.
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Eaton, Gareth R.
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作者：
MANSOOR, MA;SVARDAL, AM;UELAND, PM
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作者：
Jones, Mathew W.;Strickland, Rachel A.;Haddleton, David M.
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Haddleton, David M.