In vitro translation of type A Clostridium botulinum neurotoxin heavy chain and analysis of its binding to rat synaptosomes.
In vitro translation of type A Clostridium botulinum neurotoxin heavy chain and analysis of its binding to rat synaptosomes.
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A型肉毒杆菌神经毒素重链的体外翻译及其与大鼠突触体的结合分析。
DOI：
10.1023/a:1020655701852
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发表时间：
1999
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Singh,BR
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Li,L;Singh,BR
肉毒神经毒素（BoNT）是抑制外周胆碱能突触释放神经递质的高效毒素。BoNT由通过二硫键连接的变性轻链（LC; 50 kDa）和结合/易位重链（HC; 100 kDa）组成。用聚合酶链反应（PCR）扩增了肉毒梭菌重链基因（BoNT/A HC）的DNA片段。coliPET-15 b载体中，通过抗BoNT/A多克隆抗体鉴定体外翻译的[35 S]BoNT/A HC，并用于研究毒素与大鼠突触体的结合。[35 S]BoNT/A HC与突触体的结合被500倍过量的冷BoNT/A以及与胰蛋白酶孵育所消除。用抗BoNT/A或GT 1b处理BoNT/A HC阻断其与突触体的结合。放射性BoNT/A HC在大鼠和牛突触体制备物中识别对应于150（P150）、120（P120）和75（P75）kDa分子量的三种蛋白质。这些结果代表功能性全长BoNT重链的首次成功表达。
Botulinum neurotoxins (BoNTs) are highly potent toxins that inhibit neurotransmitter release from peripheral cholinergic synapses. BoNTs consist of a toxifying light chain (LC; 50 kDa) and a binding/translocating heavy chain (HC; 100 kDa) linked through a disulfide bond. A DNA fragment encoding type AClostridium botulinumheavy chain (BoNT/A HC) was amplified by polymerase chain reaction and cloned into anE. coliPET-15b vector.In vitrotranslated [35S]BoNT/A HC was identified by anti-BoNT/A polyclonal antibodies, and was used to investigate the binding of the toxin to rat synaptosomes. The binding of [35S]BoNT/A HC to synaptosomes was abolished by 500-fold excess of cold BoNT/A, and by incubation with trypsin. Treatment of BoNT/A HC with anti-BoNT/A or GT1bblocked its binding to synaptosomes. The radioactive BoNT/A HC recognized three proteins corresponding to a molecular mass of 150 (P150), 120 (P120), and 75 (P75) kDa in rat and bovine synaptosomal preparations. These results represent the first successful expression of functional full-length BoNT heavy chain.
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