Purification of human lung leukotriene C4 synthase and preparation of a polyclonal antibody.
Purification of human lung leukotriene C4 synthase and preparation of a polyclonal antibody.
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人肺白三烯C4合酶的纯化及多克隆抗体的制备。
DOI：
10.1164/ajrccm.152.1.7599836
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发表时间：
1995
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Austen,KF
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Penrose,JF;Spector,J;Lam,BK;Friend,DS;Xu,K;Jack,RM;Austen,KF
白三烯（LT） C4合成酶是一种完整的膜蛋白，催化LTA4与还原性谷胱甘肽结合形成LTC4。LTC4合成酶已从转化细胞系中克隆并鉴定，但该蛋白尚未从组织来源中定义。利用s -己基谷胱甘肽层析和LTC4亲和层析，从人肺组织中纯化出LTC4合成酶。纯化率大于10万倍，收率为8 ~ 25% （n = 4）。纯化的LTC4合成酶在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中迁移为18-kD蛋白，其19个n端氨基酸序列与KG-1骨髓细胞纯化的LTC4合成酶或KG-1文库在COS细胞中的表达克隆相同。利用兔抗纯化LTC4合成酶的多克隆IgG，对人肺组织、嗜酸性粒细胞、KG-1细胞和血小板的LTC4合成酶进行SDS-PAGE免疫印迹检测，结果显示其为18kd蛋白。用抗LTC4合成酶IgG对人肺切片肺泡巨噬细胞进行免疫荧光染色，发现LTC4合成酶主要分布在核周。因此，LTC4合成酶，负责形成半胱氨酸LTs的生物合成酶，以一种明显与造血细胞相同的形式存在于肺组织中。
Leukotriene (LT) C4 synthase is an integral membrane protein that catalyzes the conjugation of LTA4 to reduced glutathione to form LTC4. LTC4 synthase has been cloned and characterized from transformed cell lines, but the protein has not been defined from a tissue source. LTC4 synthase was purified to homogeneity from human lung tissue, utilizing S-hexyl glutathione chromatography followed by LTC4 affinity chromatography. A greater than 100,000-fold purification with a yield of 8 to 25% (n = 4) was achieved. The purified LTC4 synthase migrated in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) as an 18-kD protein, and its 19 N-terminal amino acid sequence is identical to that of purified LTC4 synthase from KG-1 myeloid cells or from expression cloning of a KG-1 library in COS cells. Using a rabbit polyclonal IgG raised against purified LTC4 synthase, SDS-PAGE immunoblotting of LTC4 synthase from human lung tissue, eosinophils, KG-1 cells, and platelets showed an 18-kD protein. Immunofluorescence staining of alveolar macrophages in human lung sections with the anti-LTC4 synthase IgG revealed LTC4 synthase to be largely perinuclear in distribution. Thus, LTC4 synthase, the biosynthetic enzyme responsible for the formation of cysteinyl LTs, is present in lung tissue in a form apparently identical to that of hematopoietic cells.
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10.1016/s0021-9258(19)57499-3
发表时间：
1986
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
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通讯作者：
Shozo Yamamotog
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DOI：
--
发表时间：
1986
期刊：
Journal of immunology (Baltimore, Md. : 1950)
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--
作者：
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1988-01
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Jacques A. MacloufS;R. C. Murphy
通讯作者：
Jacques A. MacloufS;R. C. Murphy
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DOI：
10.1073/pnas.83.4.857
发表时间：
1986
影响因子：
11.1
作者：
C. Rouzer;T. Matsumoto;B. Samuelsson
通讯作者：
B. Samuelsson
大鼠嗜碱性白血病细胞白三烯 C4 合成酶的分离和表征。
DOI：
10.1073/pnas.82.24.8399
发表时间：
1985
影响因子：
11.1
作者：
Yoshimoto,T;Soberman,RJ;Lewis,RA;Austen,KF
通讯作者：
Austen,KF