Proteomic profiling of tandem affinity purified 14-3-3 protein complexes in Arabidopsis thaliana.
Proteomic profiling of tandem affinity purified 14-3-3 protein complexes in Arabidopsis thaliana.
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拟南芥中串联亲和纯化的 14-3-3 蛋白复合物的蛋白质组学分析。
DOI：
10.1002/pmic.200800445
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发表时间：
2009-06
期刊：
影响因子：
3.4
通讯作者：
Harper, Jeffrey F.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Chang, Ing-Feng;Curran, Amy;Woolsey, Rebekah;Quilici, David;Cushman, John C.;Mittler, Ron;Harmon, Alice;Harper, Jeffrey F.
在真核生物中，14-3-3二聚体调节数百种功能多样的蛋白质（客户端），通常在磷酸化依赖的相互作用中。为了发现新的客户，来自拟南芥的14-3-3 omega（At 1g 78300）被改造为具有“串联亲和纯化”（TAP）标签并在转基因植物中表达。通过串联质谱法分析纯化的复合物。结果表明，14-3-3 ω可以与拟南芥中表达的12种14-3-3同种型中的至少10种二聚化。121个推定的客户端的鉴定为14-3-3与各种蛋白质的体内相互作用提供了支持，包括参与以下的蛋白质：（1）离子转运，如K+通道（K + K），Cl−通道（CLCg），属于谷氨酸受体家族的Ca 2+通道（GLR 1.2、2.1、2.9、3.4、3.7）;（2）激素信号传导，如ACC合酶（参与乙烯合成的同种型ACS-6、7和8）和油菜素受体BRI 1和BAK 1;（3）转录，如7个WRKY家族转录因子;（4）代谢，如磷酸烯醇丙酮酸（PEP）羧化酶;和（5）脂质信号传导，如磷脂酶D（β和γ）。超过80%（101）的这些推定的客户端代表以前身份不明的14-3-3互动。这些结果使植物中鉴定的推定14-3-3客户端的数量增加到300多个。
In eukaryotes, 14-3-3 dimers regulate hundreds of functionally diverse proteins (clients), typically in phosphorylation-dependent interactions. To uncover new clients, a 14-3-3 omega (At1g78300) from Arabidopsis was engineered with a “tandem affinity purification” (TAP) tag and expressed in transgenic plants. Purified complexes were analyzed by tandem mass spectrometry. Results indicate that 14-3-3 omega can dimerize with at least 10 of the 12 14-3-3 isoforms expressed in Arabidopsis. The identification here of 121 putative clients provides support for in vivo 14-3-3 interactions with a diverse array of proteins, including those involved in: (1) Ion transport, such as a K+ channel (GORK), a Cl− channel (CLCg), Ca2+ channels belonging to the glutamate receptor family (GLRs 1.2, 2.1, 2.9, 3.4, 3.7); (2) hormone signaling, such as ACC synthase (isoforms ACS-6, 7 and 8 involved in ethylene synthesis) and the brassinolide receptors BRI1 and BAK1; (3) transcription, such as 7 WRKY family transcription factors; (4) metabolism, such as phosphoenol pyruvate (PEP) carboxylase; and (5) lipid signaling, such as phospholipase D (β, and γ). More than 80% (101) of these putative clients represent previously unidentified 14-3-3 interactors. These results raise the number of putative 14-3-3 clients identified in plants to over 300.
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