Vectors for expression of proteins with single or combinatorial fluorescent protein and tandem affinity purification tags in Dictyostelium.
Vectors for expression of proteins with single or combinatorial fluorescent protein and tandem affinity purification tags in Dictyostelium.
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DOI：
10.1016/j.pep.2007.01.001
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发表时间：
2007-06
影响因子：
1.6
通讯作者：
Schaap, Pauline
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Meima, Marcel E.;Weening, Karin E.;Schaap, Pauline
关键词：
我们构建了一系列表达载体，用于纯化盘齿钢菌的天然蛋白和蛋白复合物。蛋白质纯化是通过选择蛋白质的c端或n端融合到串联亲和纯化（TAP）标签来实现的。TAP标签由一个蛋白a标签和一个钙调蛋白结合肽（calmodulin binding peptide， CBP）组成，已成功用于从酵母和动物细胞中纯化天然蛋白复合物。蛋白表达由组成型肌动蛋白15启动子驱动，载体可选择携带额外的绿色或黄色荧光蛋白（GFP或YFP）标签，用于在C端或n端位置融合。以盘基ostelium Arp2/3复合物的成员之一pArc-34为诱饵，对天然盘基ostelium蛋白复合物进行串联亲和纯化。对pArc-34相关蛋白进行变性和SDS-PAGE分离后，可以鉴定出Arp2/3复合物的所有成员。
We constructed a series of expression vectors for purification of native proteins and protein complexes in Dictyostelium. Protein purification is achieved by either a C-terminal or N-terminal fusion of the protein of choice to the tandem affinity purification (TAP) tag. The TAP tag consists of a protein A tag and a calmodulin binding peptide (CBP) and has been successfully used for purification of native protein complexes from yeast and animal cells. Protein expression is driven by the constitutive actin 15 promoter and the vectors optionally carry additional green- or yellow fluorescent protein (GFP or YFP) tags for fusion at either a C- or N-terminal location. Tandem affinity purification of native Dictyostelium protein complexes was tested by using pArc-34, one of the members of the well characterized Dictyostelium Arp2/3 complex, as bait. After denaturation and SDS–PAGE separation of the pArc-34 associated proteins all members of the Arp2/3 complex could be identified.
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影响因子：
11.4
作者：
Caspary, F;Shevchenko, A;Séraphin, B
通讯作者：
Séraphin, B
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通讯作者：
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发表时间：
1992-09-15
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11.1
作者：
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通讯作者：
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影响因子：
11.4
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