Fine tuning of the E. coli NusB:NusE complex affinity to BoxA RNA is required for processive antitermination.
Fine tuning of the E. coli NusB:NusE complex affinity to BoxA RNA is required for processive antitermination.
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DOI：
10.1093/nar/gkp736
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发表时间：
2010-01
影响因子：
14.9
通讯作者：
Gottesman ME
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Burmann BM;Luo X;Rösch P;Wahl MC;Gottesman ME
λ噬菌体在大肠杆菌宿主细胞中的增殖需要λN蛋白和四种宿主Nus因子NusA、B、E（核糖体S10）和G介导的λ染色体上的转录抗终止。E.具有λnutL或λnutR RNA的单链BoxA基序的大肠杆菌NusB：NusE异二聚体对于该反应至关重要。类似地，NusB：NusE与BoxA基序的结合对于抑制核糖体RNA（rrn）操纵子中的转录终止是必需的。我们使用荧光各向异性来测量NusB和NusB：NusE异源二聚体与长度和序列不同的含BoxA的RNA的结合特性。我们的研究结果表明，BoxA是必要的和充分的结合。我们还研究了在nusA1或nusE71突变体中允许λ生长的功能获得性D118N NusB突变体。体内λ爆发大小测定、CD热解折叠测量和该突变体以及各种其他NusB D118突变体的X射线晶体学显示氨基酸118的大小和极性对于RNA结合和其他相互作用的重要性。我们的工作表明，NusB：NusE复合物对BoxA RNA的亲和力被精确调节，以最大限度地控制转录终止。
Phage λ propagation in Escherichia coli host cells requires transcription antitermination on the λ chromosome mediated by λN protein and four host Nus factors, NusA, B, E (ribosomal S10) and G. Interaction of E. coli NusB:NusE heterodimer with the single stranded BoxA motif of λnutL or λnutR RNA is crucial for this reaction. Similarly, binding of NusB:NusE to a BoxA motif is essential to suppress transcription termination in the ribosomal RNA (rrn) operons. We used fluorescence anisotropy to measure the binding properties of NusB and of NusB:NusE heterodimer to BoxA-containing RNAs differing in length and sequence. Our results demonstrate that BoxA is necessary and sufficient for binding. We also studied the gain-of-function D118N NusB mutant that allows λ growth in nusA1 or nusE71 mutants. In vivo λ burst-size determinations, CD thermal unfolding measurements and X-ray crystallography of this as well as various other NusB D118 mutants showed the importance of size and polarity of amino acid 118 for RNA binding and other interactions. Our work suggests that the affinity of the NusB:NusE complex to BoxA RNA is precisely tuned to maximize control of transcription termination.
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DOI：
10.1107/s0907444904019158
发表时间：
2004-12-01
影响因子：
2.2
作者：
Emsley, P;Cowtan, K
通讯作者：
Cowtan, K
影响因子：
64.8
作者：
MIZUSHIMA, S;NOMURA, M
通讯作者：
NOMURA, M
影响因子：
10.5
作者：
MASON, SW;GREENBLATT, J
通讯作者：
GREENBLATT, J
DOI：
10.1073/pnas.0405883101
发表时间：
2004-09-21
影响因子：
11.1
作者：
Bonin, I;Mühlberger, R;Wahl, MC
通讯作者：
Wahl, MC
影响因子：
5.6
作者：
PATTERSON, TA;ZHANG, ZS;COURT, DL
通讯作者：
COURT, DL