Discovery of a hepatitis C target and its pharmacological inhibitors by microfluidic affinity analysis.
Discovery of a hepatitis C target and its pharmacological inhibitors by microfluidic affinity analysis.
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DOI：
10.1038/nbt.1490
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发表时间：
2008-09
影响因子：
46.9
通讯作者：
Quake, Stephen R.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Einav, Shirit;Gerber, Doron;Bryson, Paul D.;Sklan, Ella H.;Elazar, Menashe;Maerkl, Sebastian J.;Glenn, Jeffrey S.;Quake, Stephen R.
丙型肝炎病毒（HCV）是病毒性肝炎的主要原因，迫切需要更有效的治疗方法。我们使用体外蛋白表达和微流控亲和分析来研究HCV跨膜蛋白NS4B的RNA结合，NS4B在HCV RNA复制中起着至关重要的作用。我们发现HCV NS4B结合RNA，并且这种结合对病毒基因组负链的3′末端具有特异性，解离常数（Kd）约为3.4 nM。化合物文库的高通量微流体筛选鉴定了18种基本上抑制NS4B与RNA结合的化合物。这些化合物之一，盐酸克立咪唑，被发现在细胞培养中抑制HCV RNA复制，这是通过其抑制NS4B的RNA结合介导的，对宿主细胞几乎没有毒性。这些结果对HCV的生命周期产生了新的见解，并为药物开发提供了候选化合物。
More effective therapies are urgently needed against hepatitis C virus (HCV), a major cause of viral hepatitis. We used in vitro protein expression and microfluidic affinity analysis to study RNA binding by the HCV transmembrane protein NS4B, which plays an essential role in HCV RNA replication. We show that HCV NS4B binds RNA and that this binding is specific for the 3′ terminus of the negative strand of the viral genome with a dissociation constant (Kd) of ~3.4 nM. A high-throughput microfluidic screen of a compound library identified 18 compounds that substantially inhibited binding of RNA by NS4B. One of these compounds, clemizole hydrochloride, was found to inhibit HCV RNA replication in cell culture that was mediated by its suppression of NS4B’s RNA binding, with little toxicity for the host cell. These results yield new insight into the HCV life cycle and provide a candidate compound for pharmaceutical development.
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