Proteomic scale high-sensitivity analyses of GPI membrane anchors.
Proteomic scale high-sensitivity analyses of GPI membrane anchors.
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DOI：
10.1007/s10719-008-9116-x
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发表时间：
2009-11
影响因子：
3
通讯作者：
Ferguson, Michael A. J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mehlert, Angela;Ferguson, Michael A. J.
糖基磷脂酰肌醇（GPI）锚定蛋白在真核细胞中普遍存在。早期的分析方法需要大量纯化的蛋白质来阐明GPI的结构。本文描述了在“蛋白质组学”规模上分析GPIs的方法。部分纯化的蛋白质可以在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳上运行，然后印迹到聚偏二氟乙烯（PVDF）膜上。在识别蛋白质后，可以对PVDF片进行各种化学处理，这些处理对GPI结构是特定的。第一种方法使用气相色谱-质谱法，它能够确认GPI锚的存在。第二种方法依赖于磷酸键的裂解，并允许通过电喷雾或基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法来阐明碳水化合物的结构。所述的最终方法使用葡糖胺残基的脱氨基作用以释放脂质部分用于质谱分析。
Glycosylphosphatidylinositol (GPI) anchored proteins are ubiquitous in eukaryotic cells. Earlier analysis methods required large amounts of purified protein to elucidate the structure of the GPI. This paper describes methods for analyzing GPIs on a ‘proteomic’ scale. Partially purified proteins may be run on sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis and then blotted onto a polyvinylidene difluoride (PVDF) membrane. Following identification of the protein the piece of PVDF may be subjected to various chemical treatments, which are specific for GPI structures. The first method uses gas chromatography–mass spectrometry and it enables the presence of a GPI anchor to be confirmed. The second method depends on the cleavage of phosphate bonds and permits the carbohydrate structure to be elucidated by electrospray or matrix assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. The final method described uses deamination of the glucosamine residue to release the lipid moiety for analysis by mass spectrometry.
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作者：
Mehlert, A;Richardson, JM;Ferguson, MAJ
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Mehlert, Angela;Ferguson, Michael A. J.
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