X-ray structure of snow flea antifreeze protein determined by racemic crystallization of synthetic protein enantiomers.
X-ray structure of snow flea antifreeze protein determined by racemic crystallization of synthetic protein enantiomers.
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DOI：
10.1021/ja8013538
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发表时间：
2008-07-30
影响因子：
15
通讯作者：
Kent SB
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Pentelute BL;Gates ZP;Tereshko V;Dashnau JL;Vanderkooi JM;Kossiakoff AA;Kent SB
使用化学蛋白质合成和外消旋蛋白质结晶来确定雪蚤抗冻蛋白（sfAFP）的X射线结构。含有等量化学合成蛋白质 d-sfAFP 和 l-sfAFP 的外消旋溶液比单独的 l-sfAFP 更容易形成晶体。 d-sfAFP 和 l-Se-sfAFP 的准外消旋混合物也更容易形成晶体，d-sfAFP 是一种化学蛋白质类似物，在一个残基上含有额外的 -SeCH2- 部分，因此与真正的对映体略有不同。然后使用准外消旋晶体的多波长反常色散 (MAD) 定相来确定 sfAFP 蛋白分子的 X 射线结构。所得模型用于通过分子置换求解l-sfAFP的X射线结构，分辨率为0.98 A。l-sfAFP分子由六个反平行的左手PPII螺旋组成，以两组三个为一组堆叠，形成具有一个亲水面和一个疏水面的紧凑砖状结构。这是一种新颖的实验蛋白质结构，与为 sfAFP 提出的结构模型非常相似。这些结果说明了全化学合成结合外消旋结晶和 X 射线晶体学在确定蛋白质的未知结构方面的实用性。
Chemical protein synthesis and racemic protein crystallization were used to determine the X-ray structure of the snow flea antifreeze protein (sfAFP). Crystal formation from a racemic solution containing equal amounts of the chemically synthesized proteins d-sfAFP and l-sfAFP occurred much more readily than for l-sfAFP alone. More facile crystal formation also occurred from a quasi-racemic mixture of d-sfAFP and l-Se-sfAFP, a chemical protein analogue that contains an additional -SeCH2- moiety at one residue and thus differs slightly from the true enantiomer. Multiple wavelength anomalous dispersion (MAD) phasing from quasi-racemate crystals was then used to determine the X-ray structure of the sfAFP protein molecule. The resulting model was used to solve by molecular replacement the X-ray structure of l-sfAFP to a resolution of 0.98 A. The l-sfAFP molecule is made up of six antiparallel left-handed PPII helixes, stacked in two sets of three, to form a compact brick-like structure with one hydrophilic face and one hydrophobic face. This is a novel experimental protein structure and closely resembles a structural model proposed for sfAFP. These results illustrate the utility of total chemical synthesis combined with racemic crystallization and X-ray crystallography for determining the unknown structure of a protein.
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影响因子：
56.9
作者：
DAWSON, PE;MUIR, TW;KENT, SBH
通讯作者：
KENT, SBH
影响因子：
56.9
作者：
SCHNOLZER, M;KENT, SBH
通讯作者：
KENT, SBH
DOI：
10.1107/s0907444901014007
发表时间：
2001-10-01
期刊：
ACTA CRYSTALLOGRAPHICA SECTION D-BIOLOGICAL CRYSTALLOGRAPHY
影响因子：
--
作者：
Perrakis, A;Harkiolaki, M;Lamzin, VS
通讯作者：
Lamzin, VS
影响因子：
15
作者：
Pentelute BL;Gates ZP;Dashnau JL;Vanderkooi JM;Kent SB
通讯作者：
Kent SB
影响因子：
15
作者：
Johnson, Erik C. B.;Kent, Stephen B. H.
通讯作者：
Kent, Stephen B. H.