Expression, Purification, and Characterization of Isoform 1 of the Plasma Membrane Ca2+ Pump
Expression, Purification, and Characterization of Isoform 1 of the Plasma Membrane Ca2+ Pump
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血浆膜 Ca2 泵异构体 1 的表达、纯化和表征
DOI：
--
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发表时间：
2003
影响因子：
4.8
通讯作者：
E. Carafoli
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
D. Guerini;Bin Pan;E. Carafoli
质膜Ca ~（2+）ATP酶同工型1（PMCA 1）广泛分布于组织和细胞中，但关于其性质的信息很少。同种型在Sf 9细胞中过表达，在钙调蛋白柱上纯化，并在功能上表征。表达水平非常低，但可以分离足够量的蛋白质用于生化表征。PMCA 1对钙调素的亲和力与另一种普遍存在的PMCA亚型PMCA 4相似。通过磷酸化中间体的形成来评价PMCA 1对ATP的亲和力，其高于PMCA 4泵的亲和力。重组PMCA 1泵是一个更好的底物cAMP依赖性蛋白激酶比PMCA 2和PMCA 4亚型。对过表达PMCA泵的Sf 9细胞进行的脉冲和追逐实验表明，PMCA 1的稳定性远低于PMCA 4和PMCA 2亚型，即PMCA 1对钙蛋白酶降解的敏感性要高得多。钙蛋白酶的影响是不是一个普遍较高的敏感性的PMCA 1的蛋白水解降解的结果，因为胰蛋白酶的降解模式是相同的三种亚型。
The plasma membrane Ca2+ ATPase isoform 1(PMCA1) is ubiquitously distributed in tissues and cells, but only scarce information is available on its properties. The isoform was overexpressed in Sf9 cells, purified on calmodulin columns, and characterized functionally. The level of expression was very low, but sufficient amounts of the protein could be isolated for biochemical characterization. The affinity of PMCA1 for calmodulin was similar to that of PMCA4, the other ubiquitous PMCA isoform. The affinity of PMCA1 for ATP, evaluated by the formation of the phosphorylated intermediate, was higher than that of the PMCA4 pump. The recombinant PMCA1 pump was a much better substrate for the cAMP-dependent protein kinase than the PMCA2 and PMCA4 isoforms. Pulse and chase experiments on Sf9 cells overexpressing the PMCA pumps showed that PMCA1 was much less stable than the PMCA4 and PMCA2 isoforms, i.e. PMCA1 had a much higher sensitivity to degradation by calpain. The effect of calpain was not the result of a general higher susceptibility of the PMCA1 to proteolytic degradation, because the pattern of degradation by trypsin was the same in the three isoforms.
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DOI：
10.1016/0169-328x(92)90229-5
发表时间：
1992-12
期刊：
Brain research. Molecular brain research
影响因子：
--
作者：
William L. Stahl;T. J. Eakin;JAMES W. M. Owens;J. Breininger;P. Filuk;W. R. Anderson
通讯作者：
William L. Stahl;T. J. Eakin;JAMES W. M. Owens;J. Breininger;P. Filuk;W. R. Anderson
大鼠脑质膜 Ca2 转运 ATP 酶的两种亚型的分子克隆。
DOI：
--
发表时间：
1988
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Shull,GE;Greeb,J
通讯作者：
Greeb,J
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)51505-2
发表时间：
1989-11
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
J. Greeb;G. Shull
通讯作者：
J. Greeb;G. Shull
编码钙调蛋白结合域和质膜 Ca(2)-ATP 酶亚型 1、2、3 和 4 的 C 末端的外显子的选择性剪接。
DOI：
--
发表时间：
1993
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Keeton,TP;Burk,SE;Shull,GE
通讯作者：
Shull,GE
分析编码质膜钙泵 ATP 酶的 mRNA 的组织特异性分布，并在 cDNA 和基因组水平表征 PMCA4 的交替剪接形式。
DOI：
--
发表时间：
1992
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Brandt,P;Neve,RL;Kammesheidt,A;Rhoads,RE;Vanaman,TC
通讯作者：
Vanaman,TC