The Transposon-Encoded Protein TnpB Processes Its Own mRNA into ωRNA for Guided Nuclease Activity.
The Transposon-Encoded Protein TnpB Processes Its Own mRNA into ωRNA for Guided Nuclease Activity.
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DOI：
10.1089/crispr.2023.0015
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发表时间：
2023-06
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TnpB是专性移动元件引导活性（OMEGA） rna引导核酸酶家族的成员，位于转座子中，可能在基因组中起维持转座子的作用。以前，研究表明TnpB以rna引导的方式切割双链和单链DNA底物，但TnpB核糖核蛋白（RNP）复合物的生物发生尚不清楚。使用体外纯化的载脂蛋白TnpB，我们证明了TnpB通过5 '加工从其自身的mRNA产生引导ωRNA （ωRNA）的能力。我们还发现了一个潜在的顺式调控机制，即TnpB mRNA的一个区域抑制RNP复合物的DNA切割。我们通过检测TnpB家族59个同源植物的ωRNA加工和rna引导的核酸酶活性进一步扩展了TnpB的特征。这项工作揭示了TnpB的一个新的功能，ωRNA生物发生，并表征了这个生物技术上有用的可编程酶家族的其他成员。
TnpB is a member of the Obligate Mobile Element Guided Activity (OMEGA) RNA-guided nuclease family, is harbored in transposons, and likely functions to maintain the transposon in genomes. Previously, it was shown that TnpB cleaves double- and single-stranded DNA substrates in an RNA-guided manner, but the biogenesis of the TnpB ribonucleoprotein (RNP) complex is unknown. Using in vitro purified apo TnpB, we demonstrate the ability of TnpB to generate guide omegaRNA (ωRNA) from its own mRNA through 5′ processing. We also uncover a potential cis-regulatory mechanism whereby a region of the TnpB mRNA inhibits DNA cleavage by the RNP complex. We further expand the characterization of TnpB by examining ωRNA processing and RNA-guided nuclease activity in 59 orthologs spanning the natural diversity of the TnpB family. This work reveals a new functionality, ωRNA biogenesis, of TnpB, and characterizes additional members of this biotechnologically useful family of programmable enzymes.
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