角蛋白18与剪切因子PSF相互作用介导PSF的膜易位并维持髓系白血病细胞的化疗敏感性
角蛋白18与剪切因子PSF相互作用介导PSF的膜易位并维持髓系白血病细胞的化疗敏感性
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DOI：
10.19723/j.issn.1671-167x.2020.02.004
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
许成山
中科院分区：
文献类型：
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作者：
任思楣;龙璐瑶;许成山
目的:鉴定多嘧啶结合蛋白相关的剪切因子(polypyrimidine tract-binding protein-associated splicing factor,PSF)在髓系白血病细胞内的伴侣蛋白,探讨PSF在敏感HL60细胞和耐药的HL60/DOX细胞中易位细胞膜的模式和机制。方法:通过脂质体瞬时转染PSF真核表达载体过表达PSF,进一步结合流式细胞术在转染后24 h、48 h、 72 h检测PSF在细胞膜上的表达水平。构建链亲和素结合肽(streptavidin binding peptide,SBP)和PSF的融合表达载体,转染载体,过表达SBP-PSF融合蛋白。通过链亲和素磁珠共沉淀法和质谱分析,鉴定PSF在细胞内的伴侣蛋白。在慢病毒载体中插入角蛋白18(cytokeratin 18,K18)干扰序列,转染293T细胞制备病毒液。用慢病毒感染HL60和HL60/DOX细胞,获得稳定干扰K18的细胞株。结合流式细胞术检测干扰K18的HL60和HL60/DOX细胞中细胞膜上PSF的表达水平,由此证实CK18在HL60和HL60/DOX细胞中协同转运PSF易位细胞膜机制的异同。结果:瞬时过表达PSF后的24 h、48 h、72 h连续3 d检测细胞膜PSF表达水平,HL60敏感株细胞膜上PSF表达率分别为22.4% ± 3.5%、37.9% ± 6.0%、58.3% ± 8.8%;耐药株HL60/DOX细胞膜上PSF的表达率分别为4.7% ± 0.5%、3.9% ± 0.6%、2.9% ± 0.6%;各时间点下敏感株和耐药株的差异有统计学意义,P <0.01。免疫共沉淀和质谱证实K18为PSF在细胞内的伴侣蛋白。干扰K18的表达后,再次分析细胞膜PSF表达,发现PSF在敏感株细胞膜上的表达水平由原来的48.9% ± 5.4%降至6.2% ± 1.0%;在耐药株细胞膜上的表达水平由9.11% ± 1.2%降至2.21% ± 0.51%。结论:K18是PSF在细胞内的伴侣蛋白,在敏感细胞中,K18与PSF相互作用可帮助PSF向细胞膜转运;而在耐药株中,由于该功能障碍导致PSF在胞内发生积累从而介导耐药性。