近平滑假丝酵母 ATCC 7330 羰基还原酶 CpCR 突变体酶 的稳定性研究
近平滑假丝酵母 ATCC 7330 羰基还原酶 CpCR 突变体酶 的稳定性研究
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DOI：
10.13995/j.cnki.11-1802/ts.027246
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发表时间：
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期刊：
影响因子：
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通讯作者：
宋婷
中科院分区：
文献类型：
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作者：
龚大春;王德林;刘润;吕育财;罗华军;宋婷
通过蛋白质理性设计和定点突变技术，在近平滑假丝酵母 ATCC 7330 羰基还原酶 wtCpCR 的基础上，构建 5个突变体酶 A98N、S307N、G262N、S216N 和 S258N，考察了有机溶剂、温度、剪切力、氧气、辅酶 NADPH 浓度对突变体酶的稳定性影响。研究表明，A98N 在磷酸盐（potassium phosphate，PB）缓冲溶液中比酶活力提高 10%，而 S307N 没有酶活力，其他 3 个突变体比酶活力均有降低；A98N 和 G262N 在 PB/甲基叔丁基醚的双相体系中界面稳.定性比原始酶 wtCpCR 分别提高 1.7 和 1.4 倍；4 个突变体酶的耐热特性略有下降，T 5 0 值介于 31~36 ℃；在 100 和200 r/min 条件下，4 个突变体耐剪切力均增强，在 300 r/min 条件下 G262N 突变酶的耐剪切稳定性比 wtCpCR 增强1.3 倍；G262N 突变酶在有氧条件下的稳定性更好，比野生酶提高 1.4 倍，t 1 /2 值达到 11.87 h；辅酶浓度为 0~0.4mmol/L 时，G262N 突变酶更加稳定。该研究为该羰基还原酶 CpCR 的多点突变进一步改善酶稳定性提供重要的科学依据，同时可提高该酶在双相体系生物催化工艺的经济性