Isolation and characterization of antibody fragments selective for specific protein morphologies from nanogram antigen samples.
Isolation and characterization of antibody fragments selective for specific protein morphologies from nanogram antigen samples.
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DOI：
10.1002/btpr.1698
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发表时间：
2013-03
影响因子：
2.9
通讯作者：
Sierks, Michael R.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Kasturirangan, Srinath;Reasoner, Tim;Schulz, Philip;Boddapati, Shanta;Emadi, Sharareh;Valla, Jon;Sierks, Michael R.
关键词：
我们开发了基于原子力显微镜（AFM）的方案，该方案使得能够分离和表征基于抗体的试剂，该试剂使用低纳克量或更少的未纯化的起始材料选择性地结合靶蛋白变体。我们分离单链抗体片段（scFv），其特异性地识别与阿尔茨海默病（AD）相关的寡聚淀粉样蛋白-β（Aβ）种类，仅使用从人类AD脑组织获得的几纳克富集但未纯化的样品。我们采用了几个消减淘选步骤来去除所有结合非所需抗原的噬菌体，然后采用使用最小抗原的单个阳性淘选步骤。我们还使用AFM来表征分离的克隆的特异性，再次使用最少的材料，基于表达水平选择C6 scFv。我们发现C6选择性结合细胞和脑源性寡聚Aβ。所描述的方案易于适用于分离基于抗体的试剂以对抗具有有限可用性的其他抗原靶标。
We developed atomic force microscope (AFM) based protocols that enable isolation and characterization of antibody based reagents that selectively bind target protein variants using low nanogram amounts or less of unpurified starting material. We isolated single chain antibody fragments (scFvs) that specifically recognize an oligomeric amyloid-beta (Aβ) species correlated with Alzheimer’s disease (AD) using only a few nanograms of an enriched but not purified sample obtained from human AD brain tissue. We employed several subtractive panning steps to remove all phage binding non-desired antigens and then employed a single positive panning step using minimal antigen. We also used AFM to characterize the specificity of the isolated clones, again using minimal material, selecting the C6 scFv based on expression levels. We show that C6 selectively binds cell and brain derived oligomeric Aβ. The protocols described are readily adapted to isolating antibody based reagents against other antigenic targets with limited availability.
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DOI：
10.1073/pnas.95.11.6157
发表时间：
1998-05-26
影响因子：
11.1
作者：
Sheets, MD;Amersdorfer, P;Marks, JD
通讯作者：
Marks, JD
影响因子：
64.8
作者：
Walsh, DM;Klyubin, I;Selkoe, DJ
通讯作者：
Selkoe, DJ
影响因子：
2.4
作者：
Barkhordarian, Hedieh;Emadi, Sharareh;Sierks, Michael R.
通讯作者：
Sierks, Michael R.
DOI：
10.1016/j.nano.2007.06.001
发表时间：
2007-09-01
影响因子：
5.4
作者：
Shlyakhtenko, Luda S.;Yuan, Bin;Sierks, Michael R.
通讯作者：
Sierks, Michael R.
DOI：
10.1039/c1ib00018g
发表时间：
2011-12
期刊：
Integrative biology : quantitative biosciences from nano to macro
影响因子：
--
作者：
Sierks MR;Chatterjee G;McGraw C;Kasturirangan S;Schulz P;Prasad S
通讯作者：
Prasad S