Purification and characterization of the activated mineralocorticoid receptor from rat myocardium.
Purification and characterization of the activated mineralocorticoid receptor from rat myocardium.
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大鼠心肌中激活的盐皮质激素受体的纯化和表征。
DOI：
10.1016/0304-4165(90)90192-y
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发表时间：
1990
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
M. Agarwal
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
G. Lázár;M. Pagano;M. Agarwal
用 10 nM 氚化 RU 26752、R 5020 或醛固酮对肾上腺切除大鼠的心脏细胞质进行放射性标记，在 1 μM RU 38486 存在的情况下使盐皮质激素受体 (MCR) 饱和，从而阻断糖皮质激素和孕激素受体。通过木炭处理去除游离类固醇，并使放射性标记的胞质溶胶通过磷酸纤维素柱。磷酸纤维素洗脱液中的 MCR 峰在 25°C 下激活 45 分钟，吸附到 DNA-纤维素上，最后用含有 1 M 氯化钾或 25 mM 氯化镁的缓冲液各提取一次。合并的 DNA-纤维素提取物用 10 nM [3H]RU 26752 重新平衡，在聚丙烯酰胺凝胶电泳上解析为 78 kDa 的单一均匀条带。对 DEAE-纤维素-52 上纯化的 MCR 进行离子交换分析，显示 RU 26752 和 R 5020 在 0.017 M 磷酸钠区域有一个单峰，但醛固酮在此过程中解离。分子过滤 Ultrogel AcA-44 柱显示出一个主要的 145 kDa 峰，以及一些 40 和 80 kDa 的较小组分。纯化的 MCR 的这些流体动力学特性与粗心肌胞质中的天然受体的流体动力学特性不同，表明 MCR 介导的反应的表达可能需要一些体内翻译后修饰。
Cardial cytosol from adrenalectomized rats was radiolabelled with 10 nM tritiated RU 26752, R 5020 or aldosterone, tos saturate the mineralocorticoid receptor (MCR) in the presence of 1 μM RU 38486 to block the glucocorticoid and progestin receptors. Free steroids were removed by charcoal treatment and the radiolabelled cytosol was passed through a phosphocellulose column. The MCR peak in the phosphocellulose eluate was activated at 25° C for 45 min, adsorbed onto the DNA-cellulose and finally extracted once each with buffers containing 1 M potassium chloride or 25 mM magnesium chloride. The pooled DNA-cellulose extracts, reequilibrated with 10 nM [3H]RU 26752, were resolved as a single, homogenoous band of 78 kDa upon polyacrylamide gel electrophoresis. Ion-exchange analysis of the purified MCR on DEAE-cellulose-52 revealed a single peak in the 0.017 M sodium phosphate region with both RU 26752 and R 5020, but aldosterone dissociated during this procedure. Molecular filtration Ultrogel AcA-44 columns revealed a major 145 kDa peak, with some smaller components of 40 and 80 kDa. These hydrodynamic properties of the purified MCR are at variance with those of the native receptor in crude myocardial cytosol, and suggest that some post-translational modifications in vivo may be required for the expression of MCR-mediated responses.
DOI：
10.1016/s0021-9258(18)68698-3
发表时间：
1988-05
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
D. Mendel;E. Ortí
通讯作者：
D. Mendel;E. Ortí
有证据表明内源性热稳定糖皮质激素受体稳定因子是未转化受体复合物的金属成分。
DOI：
--
发表时间：
1988
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Meshinchi,S;Grippo,JF;Sanchez,ER;Bresnick,EH;Pratt,WB
通讯作者：
Pratt,WB