A reversible protection strategy to improve Fmoc-SPPS of peptide thioesters by the N-Acylurea approach.
A reversible protection strategy to improve Fmoc-SPPS of peptide thioesters by the N-Acylurea approach.
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DOI：
10.1002/cbic.201100472
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发表时间：
2011-11-04
期刊：
影响因子：
3.2
通讯作者：
Ottesen, Jennifer J.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mahto, Santosh K.;Howard, Cecil J.;Shimko, John C.;Ottesen, Jennifer J.
c端肽硫酯是天然化学连接方法制备全合成或半合成蛋白质的重要组成部分。然而，通过Fmoc固相肽合成高效生成c端硫酯仍然是一个挑战。最近的n -酰基脲合成硫酯的方法依赖于Fmoc-SPPS过程中3,4-二氨基苯甲酸（Dbz）的一个胺的失活。在这里，我们证明了这种方法会导致Dbz的过酰化形成副产物，特别是当应用于富含gly的序列时。我们发现单Dbz胺的正交烯丙氧羰基（Alloc）保护消除了这些副产物。介绍了一种受保护的Fmoc-Dbz（Alloc）基树脂，可直接用于大多数c端氨基酸的合成。合成后，定量去除Alloc基团可以转化为活性的n -酰基苯并咪唑啉酮（Nbz），它可以在连接条件下被纯化并原位转化为硫酯。该方法适用于肽- nbz偶联物的自动制备。我们证明，Dbz保护提高了组蛋白H4和组蛋白H3中富含gly的肽序列的合成纯度。
C-terminal peptide thioesters are an essential component of the native chemical ligation approach for the preparation of fully- or semi-synthetic proteins. However, efficient generation of C-terminal thioesters via Fmoc solid phase peptide synthesis remains a challenge. The recent N-acylurea approach to thioester synthesis relies on deactivation of one amine of 3,4-diaminobenzoic acid (Dbz) during Fmoc-SPPS. Here, we demonstrate that this approach results in the formation of side products by over-acylation of Dbz, particularly when applied to Gly-rich sequences. We find that orthogonal allyloxycarbonyl (Alloc) protection of a single Dbz amine eliminates these side products. We introduce a protected Fmoc-Dbz(Alloc) base resin that may be directly used for synthesis with most C-terminal amino acids. Following synthesis, quantitative removal of the Alloc group allows conversion to the active N-acyl-benzimidazolinone (Nbz) species, which may be purified and converted in situ to thioester under ligation conditions. This method is compatible with automated preparation of peptide-Nbz conjugates. We demonstrate that Dbz protection improves synthetic purity of Gly-rich peptide sequences derived from histone H4, as well as a 44-residue peptide from histone H3.
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影响因子：
8
作者：
Berrade, Luis;Camarero, Julio A.
通讯作者：
Camarero, Julio A.
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作者：
Bang, D;Pentelute, BL;Kent, SB
通讯作者：
Kent, SB
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作者：
DAWSON, PE;MUIR, TW;KENT, SBH
通讯作者：
KENT, SBH
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3.6
作者：
Camarero, JA;Hackel, BJ;Mitchell, AR
通讯作者：
Mitchell, AR
DOI：
10.1111/j.1399-3011.2001.00816.x
发表时间：
2001-03-01
期刊：
JOURNAL OF PEPTIDE RESEARCH
影响因子：
--
作者：
Grieco, P;Gitu, PM;Hruby, VJ
通讯作者：
Hruby, VJ