Taking down the FLAG! How insect cell expression challenges an established tag-system.
Taking down the FLAG! How insect cell expression challenges an established tag-system.
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DOI：
10.1371/journal.pone.0037779
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
McKimm-Breschkin JL
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Schmidt PM;Sparrow LG;Attwood RM;Xiao X;Adams TE;McKimm-Breschkin JL
1988年，《自然生物技术》的前一期杂志《生物/技术》报道了Hopp及其同事关于一种用于鉴定和纯化重组蛋白质的新标签系统的工作：FLAG标签。除了广泛使用的hexa-his标签系统之外，FLAG标签由于其小尺寸、其高溶解度、内部肠激酶切割位点的存在以及高亲和力抗FLAG抗体的商业可用性而获得了广泛的普及。令人惊讶的是，考虑到FLAG在世界范围内的许多实验室中的大量使用，我们在昆虫细胞中鉴定了一种翻译后修饰（PTM），其消除了FLAG-抗FLAG相互作用，使得该标签系统对分泌蛋白无效。本出版物显示，作为关键FLAG表位DYK的一部分的酪氨酸对硫酸化高度敏感，硫酸化是由酪蛋白磺基转移酶（TPST）的酶家族催化的PTM。我们表明，这种修饰可以导致少于20%的分泌的FLAG标记的蛋白质可用于纯化，质疑这种已建立的标签系统的普遍适用性。
In 1988 the preceding journal of Nature Biotechnology, Bio/Technology, reported a work by Hopp and co-workers about a new tag system for the identification and purification of recombinant proteins: the FLAG-tag. Beside the extensively used hexa-his tag system the FLAG-tag has gained broad popularity due to its small size, its high solubility, the presence of an internal Enterokinase cleavage site, and the commercial availability of high-affinity anti-FLAG antibodies. Surprisingly, considering the heavy use of FLAG in numerous laboratories world-wide, we identified in insect cells a post-translational modification (PTM) that abolishes the FLAG-anti-FLAG interaction rendering this tag system ineffectual for secreted proteins. The present publication shows that the tyrosine that is part of the crucial FLAG epitope DYK is highly susceptible to sulfation, a PTM catalysed by the enzyme family of Tyrosylprotein-Sulfo-transferases (TPSTs). We showed that this modification can result in less than 20% of secreted FLAG-tagged protein being accessible for purification questioning the universal applicability of this established tag system.
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影响因子：
2.9
作者：
POTIER, M;MAMELI, L;MELANCON, SB
通讯作者：
MELANCON, SB
DOI：
10.1038/nbt1088-1204
发表时间：
1988-10-01
期刊：
BIO-TECHNOLOGY
影响因子：
--
作者：
HOPP, TP;PRICKETT, KS;CONLON, PJ
通讯作者：
CONLON, PJ
影响因子：
2.9
作者：
STANKIEWICZ, PJ;GRESSER, MJ
通讯作者：
GRESSER, MJ
DOI：
10.1038/79006
发表时间：
2000-09-01
期刊：
NATURE STRUCTURAL BIOLOGY
影响因子：
--
作者：
Stetefeld, J;Jenny, M;Kammerer, RA
通讯作者：
Kammerer, RA
影响因子：
4.9
作者：
McKimmBreschkin, JL;Blick, TJ;Penn, CR
通讯作者：
Penn, CR