Cloning, enzyme characterization of recombinant human Eg5 and the development of a new inhibitor.
Cloning, enzyme characterization of recombinant human Eg5 and the development of a new inhibitor.
复制标题
重组人Eg5的克隆、酶特性及新型抑制剂的开发。
DOI：
10.1248/bpb.31.1397
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发表时间：
2008-07
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
杨蕾
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
吴梧桐;江程;刘飞;尤启冬;杨蕾
微管依赖性马达蛋白Eg 5对有丝分裂纺锤体的发育和功能至关重要。目前已成为体外高通量筛选抗有丝分裂药物的靶点。本文介绍了在大肠杆菌BL 21（DE 3）细胞中克隆、表达和纯化编码马达和接头结构域的人Eg 5的方案。研究了温度、pH、金属离子和DMSO对ATP酶活性的影响。新化合物CPUYL 064对Eg 5表现出良好的抑制作用（IC（50）值，100 nM）。对人肝癌细胞株HepG 2的增殖有抑制作用，且呈剂量和时间依赖性。CPUYL 064可使HepG 2细胞明显阻滞于G（2）/M期，并出现单星梭形。细胞凋亡的诱导进一步证实了膜磷脂的变化，线粒体膜电位的变化和DNA片段化的检测。这些结果表明，CPUYL 064可以被开发为一种新的，有效的有丝分裂阻滞化合物。
The microtubule-dependent motor protein Eg5 is essential for the development and function of the mitotic spindle. Now it has become an anti-mitotic drug target in high throughput screening for anticancer dugs in vitro. Here is a protocol for cloning, expression and purification of a human Eg5 that codes for motor and linker domain in Escherichia coli BL21 (DE3) cells. The effects of temperature, pH, metal ions and DMSO on ATPase activity were investigated. A new compound CPUYL064 showed good inhibitory effect against Eg5 (IC(50) value, 100 nM). It inhibited the proliferation of human hepatocellular liver carcinoma cell line HepG2 in a dose- and time-dependent manner. CPUYL064 induced a clear G(2)/M phase arrest and caused the monastral spindle in HepG2 cells. Induction of apoptosis was further confirmed by changes in membrane phospholipids, changes in mitochondrial membrane potential and by detection of DNA fragmentation. These results indicate that CPUYL064 could be developed as a new, potent mitotic arrest compound.
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DOI：
--
发表时间：
1994-09
期刊：
The Journal of biological chemistry
影响因子：
--
作者：
Douglas G. Cole;W. Saxton;Kathy B. Sheehan;J. Scholey
通讯作者：
Douglas G. Cole;W. Saxton;Kathy B. Sheehan;J. Scholey
影响因子：
2.9
作者：
DeBonis, S;Simorre, JP;Kozielski, F
通讯作者：
Kozielski, F
影响因子：
11.2
作者：
Sakowicz, R;Finer, JT;Wood, KW
通讯作者：
Wood, KW
DOI：
10.1113/jphysiol.1991.sp018773
发表时间：
1991-09
期刊：
The Journal of Physiology
影响因子：
--
作者：
T. Ohno;T. Kodama
通讯作者：
T. Ohno;T. Kodama
影响因子：
56.9
作者：
R. Sakowicz;M. S. Berdelis;K. Ray;C. L. Blackburn;C. Hopmann;D. Faulkner;L. Goldstein
通讯作者：
R. Sakowicz;M. S. Berdelis;K. Ray;C. L. Blackburn;C. Hopmann;D. Faulkner;L. Goldstein