Proximity-dependent biotin labeling in testicular germ cells identified TESMIN-associated proteins.
Proximity-dependent biotin labeling in testicular germ cells identified TESMIN-associated proteins.
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睾丸生殖细胞中依赖性依赖性生物素标记鉴定出与TESMIN相关的蛋白。
DOI：
10.1038/s41598-022-26501-7
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发表时间：
2022-12-23
影响因子：
4.6
通讯作者：
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）的表征是理解感兴趣蛋白质功能的关键。最近开发的邻近依赖性生物素识别（BioID）已被积极研究作为一种替代的PPI映射方法，因为它的有用性，在发现瞬态PPI。在这里，作为一个例子，在睾丸中的邻近标记蛋白质组学的应用，我们产生了两个转基因小鼠品系表达两个生物素连接酶（BioID 2或TurboID）融合TESMIN，从细胞质易位到细胞核减数分裂过程中，是繁殖所必需的。BioID 2转基因，尽管不是TurboID转基因，挽救了Tesmin KO雄性小鼠的生育力缺陷，表明TESMIN-BioID 2融合体可以在生理上取代TESMIN。此外，生物素化蛋白质下拉和亲和纯化，然后使用TESMIN-BioID 2转基因小鼠进行质谱分析，捕获了MYBL 1-MuvB复合物的调节细胞周期基因表达的组分。因此，我们的研究表明，接近标记蛋白质组学可以应用于男性生殖细胞，虽然生物素连接酶的选择需要仔细测试。
Characterization of protein–protein interactions (PPI) is a key to understanding the functions of proteins of interest. Recently developed proximity-dependent biotin identification (BioID) has been actively investigated as an alternative PPI mapping method because of its usefulness in uncovering transient PPI. Here, as an example of proximity labeling proteomics application in the testis, we generated two transgenic mouse lines expressing two biotin ligases (BioID2 or TurboID) fused with TESMIN, which translocates from the cytosol to the nucleus during meiotic progression and is required for reproduction. The BioID2 transgene, albeit not the TurboID transgene, rescued fertility defects of the Tesmin KO male mice, indicating that the TESMIN-BioID2 fusion can physiologically replace TESMIN. Furthermore, biotinylated protein pull-down and affinity-purification followed by mass spectrometry using the TESMIN-BioID2 transgenic mice captured components of the MYBL1–MuvB complex that regulate cell-cycle gene expression. Thus, our study shows that proximity labeling proteomics can be applied in male germ cells, although the choice of biotin ligase needs to be carefully tested.
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DOI：
10.1083/jcb.201112098
发表时间：
2012-03-19
期刊：
The Journal of cell biology
影响因子：
--
作者：
Roux KJ;Kim DI;Raida M;Burke B
通讯作者：
Burke B
影响因子：
16.6
作者：
Lee Y;Kim NH;Cho ES;Yang JH;Cha YH;Kang HE;Yun JS;Cho SB;Lee SH;Paclikova P;Radaszkiewicz TW;Bryja V;Kang CG;Yuk YS;Cha SY;Kim SY;Kim HS;Yook JI
通讯作者：
Yook JI
影响因子：
14.9
作者：
Perez-Riverol Y;Bai J;Bandla C;García-Seisdedos D;Hewapathirana S;Kamatchinathan S;Kundu DJ;Prakash A;Frericks-Zipper A;Eisenacher M;Walzer M;Wang S;Brazma A;Vizcaíno JA
通讯作者：
Vizcaíno JA
影响因子：
56.9
作者：
Jinek, Martin;Chylinski, Krzysztof;Charpentier, Emmanuelle
通讯作者：
Charpentier, Emmanuelle
影响因子：
3.6
作者：
Sutou, S;Miwa, K;Mitsui, Y
通讯作者：
Mitsui, Y