In Situ Analysis of Mitochondrial DNA Synthesis Using Metabolic Labeling Coupled to Fluorescence Microscopy.
In Situ Analysis of Mitochondrial DNA Synthesis Using Metabolic Labeling Coupled to Fluorescence Microscopy.
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使用代谢标记结合荧光显微镜对线粒体 DNA 合成进行原位分析。
DOI：
10.1007/978-1-0716-2922-2_8
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发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
Lewis,SamanthaC
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Smolka,JohnA;Lewis,SamanthaC
用核苷类似物5-乙炔基-2 ′-脱氧尿苷（EdU）进行代谢标记，能够选择性标记活细胞中的DNA合成。新合成的含EdU的DNA可以在提取后或在固定的细胞中使用铜催化的叠氮化物-炔环加成“点击化学”反应进行共价修饰，从而能够生物缀合到各种底物，包括用于成像研究的荧光团。虽然EdU标记常用于研究核DNA复制，但也可用于检测真核细胞细胞质中细胞器DNA的合成。在这一章中，我们概述了方法的应用EdU标记的固定培养的人类细胞中的线粒体基因组合成的研究，使用荧光标记和超分辨率光学显微镜。
Metabolic labeling with the nucleoside analog 5-ethynyl-2′-deoxyuridine (EdU) enables the selective labeling of DNA synthesis in live cells. Newly synthesized EdU-containing DNA can be covalently modified after extraction or in fixed cells using copper-catalyzed azide-alkyne cycloaddition “click chemistry” reactions, enabling bioconjugation to various substrates including fluorophores for imaging studies. While often used to study nuclear DNA replication, EdU labeling can also be leveraged to detect the synthesis of organellar DNA in the cytoplasm of Eukaryotic cells. In this chapter, we outline methods for the application of EdU labeling to the study of mitochondrial genome synthesis in fixed cultured human cells, using fluorescent labeling and superresolution light microscopy.