Chemical transformation mediated CRISPR/Cas9 genome editing in Escherichia coli
Chemical transformation mediated CRISPR/Cas9 genome editing in Escherichia coli
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大肠杆菌中化学转化介导的 CRISPR/Cas9 基因组编辑
DOI：
10.1007/s10529-018-02639-1
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发表时间：
2018-12
影响因子：
2.7
通讯作者：
Qiu Juanping
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sun Dongchang;Wang Lin;Mao Xudan;Fei Mingyue;Chen Yiyang;Shen Minjia;Qiu Juanping
开发一种方便的化学转化介导的 CRISPR/Cas9 (CT-CRISPR/Cas9) 系统，用于大肠杆菌基因组编辑。在这里，我们构建了一个CT-CRISPR/Cas9系统，可以通过化学转化精确编辑细菌基因组（替换、删除、插入或点突变目标基因）。与传统的电穿孔介导的CRISPR/Cas9 (ET-CRISPR/Cas9)系统相比，使用CT-CRISPR/Cas9系统进行基因组编辑更加便宜和简单。在 CT-CRISPR/Cas9 系统中，我们观察到 LB 琼脂平板上的高效基因组编辑。 CT-CRISPR/Cas9系统已成功地使用侧翼为引物中设计的短同源DNA片段（~ 50 bp）的编辑模板修饰了靶基因。我们使用实验室自制的CaCl2溶液进行CT-CRISPR/Cas9实验，成功编辑了大肠杆菌的基因组。使用多孔板在两种大肠杆菌菌株中评估了 CT-CRISPR/Cas9 系统在高通量基因组编辑中的潜在应用。我们的工作提供了一种简单且廉价的基因组编辑方法，有望作为常规基因工程方法得到广泛应用。
To develop a convenient chemical transformation mediated CRISPR/Cas9 (CT-CRISPR/Cas9) system for genome editing in Escherichia coli. Here, we have constructed a CT-CRISPR/Cas9 system, which can precisely edit bacterial genome (replacing, deleting, inserting or point mutating a target gene) through chemical transformation. Compared with the traditional electroporation mediated CRISPR/Cas9 (ET-CRISPR/Cas9) system, genome editing with the CT-CRISPR/Cas9 system is much cheaper and simpler. In the CT-CRISPR/Cas9 system, we observed efficient genome editing on LB-agar plates. The CT-CRISPR/Cas9 system has successfully modified the target gene with the editing template flanked by short homologous DNA fragments (~ 50 bp) which were designed in primers. We used the lab-made CaCl2 solution to perform the CT-CRISPR/Cas9 experiment and successfully edited the genome of E. coli. Potential application of the CT-CRISPR/Cas9 system in high-throughput genome editing was evaluated in two E. coli strains by using a multiwell plate. Our work provides a simple and cheap genome-editing method, that is expected to be widely applied as a routine genetic engineering method.
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影响因子：
4.4
作者：
Jiang, Yu;Chen, Biao;Yang, Sheng
通讯作者：
Yang, Sheng
DOI：
10.1126/science.1165771
发表时间：
2008-12-19
期刊：
Science (New York, N.Y.)
影响因子：
--
作者：
Marraffini LA;Sontheimer EJ
通讯作者：
Sontheimer EJ
一种用于细菌基因组一步工程的 CRISPR-Cas9 辅助非同源末端连接策略
影响因子：
6.4
作者：
Chang Y;Su T;Qi Q;Liang Q
通讯作者：
Liang Q
影响因子：
8.4
作者：
Xinna Zhu;Dongdong Zhao;Huanna Qiu;Feiyu Fan;S. Man;C. Bi;Xueli Zhang
通讯作者：
Xinna Zhu;Dongdong Zhao;Huanna Qiu;Feiyu Fan;S. Man;C. Bi;Xueli Zhang
影响因子：
4.6
作者：
Su, Tianyuan;Liu, Fapeng;Qi, Qingsheng
通讯作者：
Qi, Qingsheng