Detection and comparison of protein-DNA interactions using DNA-BIND plate and horseradish peroxidase-based colorimetric assay.
Detection and comparison of protein-DNA interactions using DNA-BIND plate and horseradish peroxidase-based colorimetric assay.
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使用 DNA-BIND 板和基于辣根过氧化物酶的比色测定法检测和比较蛋白质-DNA 相互作用。
DOI：
10.1016/j.ab.2011.01.008
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发表时间：
2011-05-01
影响因子：
2.9
通讯作者：
Wang Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Liu B;Qin Y;Wang J;Wang Y
我们描述了一种使用DNA-BINDTM平板和辣根过氧化物酶（HRP）比色法检测和比较蛋白质-DNA相互作用的方法。将氨基修饰的寡核苷酸共价固定在DNA-BINDTM平板表面。互补寡核苷酸退火后，将平板与蛋白质一起孵育，以允许序列特异性DNA结合。然后使用一抗和HRP标记的二抗，并在读取吸光度之前进行比色测定。该方法具有灵敏、特异、高通量等特点，不仅可用于蛋白质与DNA相互作用的检测，还可用于野生型和突变型蛋白质与DNA结合能力的定量比较。
We describe a procedure for detection and comparison of protein-DNA interactions using DNA-BINDTM plate and horseradish peroxidase (HRP)-based colorimetric assay. Amino-modified oligonucleotide was covalently immobilized on the surface of the DNA-BINDTM plate. After the complementary oligonucleotide was annealed, the plate was incubated with protein to allow sequence-specific DNA-binding. Primary antibody and HRP-labeled secondary antibody were then employed, and colorimetric assay was conducted before the absorbance was read. This method is sensitive, specific and high-throughput, which has been applied not only in the detection of protein-DNA interaction, but also in quantitative comparison of DNA-binding capabilities among wild type and mutant proteins.
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10.1099/vir.0.021816-0
发表时间：
2011-01
期刊：
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影响因子：
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通讯作者：
Wang J