An evolved aminoacyl-tRNA synthetase with atypical polysubstrate specificity.
An evolved aminoacyl-tRNA synthetase with atypical polysubstrate specificity.
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DOI：
10.1021/bi101929e
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发表时间：
2011-03-22
期刊：
影响因子：
2.9
通讯作者：
Schultz PG
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Young DD;Young TS;Jahnz M;Ahmad I;Spraggon G;Schultz PG
我们采用了一种基于荧光的快速筛选方法，来评估几种氨酰-tRNA合成酶（aaRSs）对一系列非天然氨基酸的多特异性。我们发现，一种对氰基苯丙氨酸特异的氨酰-tRNA合成酶（pCNF - RS）对非天然氨基酸具有较高的底物宽容性，同时保持了其区分20种标准氨基酸的能力。这种正交的pCNF - RS及其同源的琥珀无义抑制tRNA能够选择性地将18种非天然氨基酸掺入蛋白质中，包括三氟酮、炔基和肼基取代的氨基酸。为了更好地理解这种多特异性，我们测定了氨酰-tRNA合成酶/对氰基苯丙氨酸复合物的X射线晶体结构。将该结构与其他突变型氨酰-tRNA合成酶的结构进行比较表明，结合位点的大小以及其他更细微的特征都控制着底物的多特异性。
We have employed a rapid fluorescence-based screen to assess the polyspecificity of several aaRSs against an array of unnatural amino acids. We discovered that a p-cyanophenylalanine specific aminoacyl-tRNA synthetase (pCNF-RS) has high substrate permissivity for unnatural amino acids, while maintaining its ability to discriminate against the canonical twenty amino acids. This orthogonal pCNF-RS, together with its cognate amber nonsense suppressor tRNA is able to selectively incorporate 18 unnatural amino acids into proteins, including trifluoroketone, alkynyl, and hydrazino substituted amino acids. In an attempt to better understand this polyspecificity, the x-ray crystal structure of the aaRS/p-cyanophenylalanine complex was determined. A comparison of this structure with those of other mutant aaRSs showed that both binding site size and other more subtle features control substrate polyspecificitiy.
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影响因子：
2.9
作者：
Miyake-Stoner, Shigeki J.;Refakis, Christian A.;Mehl, Ryan A.
通讯作者：
Mehl, Ryan A.
影响因子：
15
作者：
Lee HS;Spraggon G;Schultz PG;Wang F
通讯作者：
Wang F
影响因子：
--
作者：
Wang, L;Schultz, PG
通讯作者：
Schultz, PG
DOI：
10.1107/s0907444904019158
发表时间：
2004-12-01
影响因子：
2.2
作者：
Emsley, P;Cowtan, K
通讯作者：
Cowtan, K
DOI：
10.1038/nsb934
发表时间：
2003-06-01
期刊：
NATURE STRUCTURAL BIOLOGY
影响因子：
--
作者：
Kobayashi, T;Nureki, O;Yokoyama, S
通讯作者：
Yokoyama, S