A Growth-Based, High-Throughput Selection Platform Enables Remodeling of 4-Hydroxybenzoate Hydroxylase Active Site.
A Growth-Based, High-Throughput Selection Platform Enables Remodeling of 4-Hydroxybenzoate Hydroxylase Active Site.
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DOI：
10.1021/acscatal.0c01892
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发表时间：
2020-06-19
期刊：
影响因子：
12.9
通讯作者：
Li H
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Maxel S;Aspacio D;King E;Zhang L;Acosta AP;Li H
我们报道了在大肠杆菌中建立的基于NADP(H)氧化还原平衡恢复的有氧生长选择平台，并展示了其在高通量加氧酶进化中的应用。在简单的生长试验之后进行一轮筛选，铜绿假单胞菌4-羟基苯甲酸羟化酶（PobA）能够有效地羟化4-羟基苯甲酸（4-HBA）和3,4-二羟基苯甲酸（3,4- dhba），这是没食子酸生物合成的两个连续步骤。结构建模可以精确地重组活性位点氢键网络，而这需要对组合序列空间进行深度导航。我们设想该选择平台在nadph依赖性氧化还原酶工程中的普遍应用。
We report an aerobic, growth-based selection platform founded on NADP(H) redox balance restoration in Escherichia coli, and we demonstrate its application in the high-throughput evolution of an oxygenase. A single round of selection followed by a facile growth assay enabled Pseudomonas aeruginosa 4-hydroxybenzoate hydroxylase (PobA) to efficiently hydroxylate both 4-hydroxybenzoic acid (4-HBA) and 3,4-dihydroxybenzoic acid (3,4-DHBA), two consecutive steps in gallic acid biosynthesis. Structural modeling suggests precise reorganization of active site hydrogen bond network, which is difficult to obtain without deep navigation of combinatorial sequence space. We envision universal application of this selection platform in engineering NADPH-dependent oxidoreductases.
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影响因子：
16.6
作者：
Mak WS;Tran S;Marcheschi R;Bertolani S;Thompson J;Baker D;Liao JC;Siegel JB
通讯作者：
Siegel JB
DOI：
10.1073/pnas.1500545112
发表时间：
2015-03-24
影响因子：
11.1
作者：
Siegel, Justin B.;Smith, Amanda Lee;Baker, David
通讯作者：
Baker, David
影响因子：
14.8
作者：
Cracan V;Titov DV;Shen H;Grabarek Z;Mootha VK
通讯作者：
Mootha VK
影响因子：
37.8
作者：
Debon, Aaron;Pott, Moritz;Hilvert, Donald
通讯作者：
Hilvert, Donald
影响因子：
4.4
作者：
Shen, Claire R.;Lan, Ethan I.;Liao, James C.
通讯作者：
Liao, James C.