Quantitation of DNA double-strand break resection intermediates in human cells.
Quantitation of DNA double-strand break resection intermediates in human cells.
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DOI：
10.1093/nar/gkt1309
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发表时间：
2014-02
影响因子：
14.9
通讯作者：
Paull TT
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Zhou Y;Caron P;Legube G;Paull TT
DNA双链断裂（DSB）处的5′链切除对于同源重组（HR）和基因组稳定性至关重要。在这里，我们开发了一种新的方法来定量测量人类细胞中的单链DNA中间体，并发现在核酸内切酶产生的断裂位点的5′链被切除高达3.5 kb的细胞周期依赖性的方式。CtIP、Mre11、Exo1或SOSS1的耗竭阻断切除，而53BP1、Ku或DNA依赖性蛋白激酶催化亚基的耗竭导致切除增加，如通过该方法测量的。虽然53BP1负调控DNA末端加工，但Brca1的缺失不会，这表明Brca1在HR中的作用主要是促进Rad51细丝形成，而不是调节末端切除。
5′ strand resection at DNA double strand breaks (DSBs) is critical for homologous recombination (HR) and genomic stability. Here we develop a novel method to quantitatively measure single-stranded DNA intermediates in human cells and find that the 5′ strand at endonuclease-generated break sites is resected up to 3.5 kb in a cell cycle–dependent manner. Depletion of CtIP, Mre11, Exo1 or SOSS1 blocks resection, while depletion of 53BP1, Ku or DNA-dependent protein kinase catalytic subunit leads to increased resection as measured by this method. While 53BP1 negatively regulates DNA end processing, depletion of Brca1 does not, suggesting that the role of Brca1 in HR is primarily to promote Rad51 filament formation, not to regulate end resection.
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