Phosphorylation assay based on multifunctionalized soluble nanopolymer.
Phosphorylation assay based on multifunctionalized soluble nanopolymer.
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DOI：
10.1021/ac2000708
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发表时间：
2011-04-01
影响因子：
7.4
通讯作者：
Tao, W. Andy
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Iliuk, Anton;Martinez, Juan S.;Hall, Mark C.;Tao, W. Andy
定量磷酸化分析对于了解细胞信号转导至关重要。在这里，我们提出了一种新技术，可以在不使用磷酸化特异性抗体的情况下以高通量形式高效测定蛋白质磷酸化。该技术基于一种称为 pIMAGO 的水溶性纳米级聚合物，该聚合物通过钛 (IV) 离子进行多功能化，可与磷蛋白特异性结合，并具有可进行酶联光谱检测的生物素基团。使用标准磷蛋白和来自全细胞提取物的纯化磷蛋白检查了 pIMAGO 用于磷酸化测定的灵敏度、特异性和定量性质。使用 pIMAGO 化学发光测定可以定量测量低至 100 pg 的磷蛋白。 pIMAGO 测定应用于体外激酶测定、激酶抑制剂筛选和内源磷酸化事件的测量。该技术为全局磷酸化分析提供了一种通用、定量的方法，具有高灵敏度和特异性。
Quantitative phosphorylation analysis is essential to understanding cellular signal transductions. Here we present a novel technology for the highly efficient assay of protein phosphorylation in high throughput format without the use of phospho-specific antibodies. The technique is based on a water-soluble, nanosize polymer, termed pIMAGO that is multi-functionalized with titanium (IV)ions for specific binding to phosphoproteins, and with biotin groups that allow for enzyme-linked spectrometric detection. The sensitivity, specificity and quantitative nature of pIMAGO for phosphorylation assays were examined with standard phosphoproteins and with purified phosphoproteins from whole cell extracts. As low as 100 pg of phosphoprotein can be measured quantitatively with the pIMAGO chemiluminescence assay. The pIMAGO assay was applied to an in vitro kinase assay, kinase inhibitor screening, and measurement of endogenous phosphorylation events. The technique provides a universal, quantitative method for global phosphorylation analysis with high sensitivity and specificity.
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影响因子：
1.8
作者：
Morgan, AG;McCauley, TJ;Millis, SZ
通讯作者：
Millis, SZ
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作者：
Rani, CSS;Qiang, M;Ticku, MK
通讯作者：
Ticku, MK
影响因子：
7
作者：
Larsen, MR;Thingholm, TE;Jorgensen, TJD
通讯作者：
Jorgensen, TJD
影响因子：
2.9
作者：
COOPER, PC;BURGESS, AW
通讯作者：
BURGESS, AW
DOI：
10.1124/jpet.105.087569
发表时间：
2005-10-01
影响因子：
3.5
作者：
Pattoli, MA;MacMaster, JF;Burke, JR
通讯作者：
Burke, JR