β-伴大豆球蛋白通过上调NOD样受体蛋白-3表达诱导猪小肠上皮细胞焦亡
β-伴大豆球蛋白通过上调NOD样受体蛋白-3表达诱导猪小肠上皮细胞焦亡
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DOI：
10.3969/j.issn.1006-267x.2021.07.047
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发表时间：
2021
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
吴金节
中科院分区：
文献类型：
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作者：
王蕾;孙智峰;刘羽佳;李思婷;谢维娜;单兴根;田朋;杨悦;丁红研;李玉;王希春;吴金节
本试验旨在探讨β-伴大豆球蛋白通过上调NOD样受体蛋白-3( NLRP-3)表达诱导猪小肠上皮细胞( IPEC-J2)焦亡的作用机制。利用慢病毒转染IPEC-J2沉默目的基因NLRP-3,采用实时荧光定量PCR( RT-qPCR)和蛋白质印迹法( Western blot)验证目的基因沉默效果。慢病毒转染成功沉默目的基因NLRP-3后,将样本分为4组:A组为对照组(未转染),B组为阴性对照组(转染慢病毒空载体),C组为干扰组(转染携带NLRP-3干扰片段的慢病毒载体),D组为 β-伴大豆球蛋白调节组(转染携带NLRP-3干扰片段的慢病毒载体+10 mg / mL的β-伴大豆球蛋白) 。利用细胞增殖毒性检测试剂盒检测细胞活性;酶联免疫吸附试验( ELISA)检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1( Caspase-1)和白细胞介素-1β( IL-1β)含量;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法( TUNEL)观察细胞阳性变化;透射电镜观察细胞形态;RT-qPCR和Western blot检测NLRP-3、凋亡相关斑点样蛋白( ASC) 、Caspase-1、IL-1β和消皮素D( GSDMD)的mRNA相对表达量及蛋白表达水平。结果表明:1)与A组相比,B组的NLRP-3 mRNA相对表达量及蛋白表达水平无显著差异( P>0.05) 。C组细胞NLRP-3 mRNA相对表达量及蛋白表达水平均极显著低于A组和B组( P<0.01) 。2)与A组相比,C组细胞Caspase-1含量显著降低( P<0.05),IL-1β含量极显著降低( P<0.01),NLRP-3、ASC、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA相对表达量和蛋白表达水平显著降低( P<0.05) 。3)与B组相比,C组细胞Caspase-1和IL-1β含量极显著降低( P<0.01),NLRP-3、ASC、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA相对表达量和蛋白表达水平显著降低( P <0.05) 。4)与C组相比,D组细胞活性极显著降低( P <0.01),IL-1β和Caspase-1含量极显著升高( P<0.01),TUNEL染色显示细胞呈阳性表达,透射电镜观察可见D组细胞肿胀、细胞膜破裂、胞浆内容物流出,线粒体变性肿胀,NLRP-3、ASC、Caspase-1、IL-1β和GSDMD mRNA相对表达量和蛋白表达水平显著升高( P<0.05) 。综上所述,β-伴大豆球蛋白上调NLRP-3表达,并通过NLRP-3 / Caspase-1 / GSDMD信号通路介导IPEC-J2细胞焦亡。