热稳定酯酰辅酶A合成酶的异源表达及酶学特性
热稳定酯酰辅酶A合成酶的异源表达及酶学特性
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DOI：
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发表时间：
2016
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
郑舰艇
中科院分区：
文献类型：
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作者：
董爽爽;王衍杰;季俊杰;郑舰艇
【目的】为寻找能合成丙酰辅酶A和丁酰辅酶A等聚酮合成前体的生物催化剂，用体外酶学实验对一个酯酰辅酶A合成酶进行了表征。【方法】利用丙二酰辅酶A合成酶作为输入序列，通过BLAST程序在Caldicellulosiruptor owensensis OL的基因组中找到1个酯酰辅酶A合成酶基因。在大肠杆菌中进行了异源表达，并通过亲和层析进行纯化。底物谱、最适反应条件、稳定性和动力学参数通过体外酶学实验进行表征，而定点突变则用于活性中心的氨基酸残基的分析。【结果】该酶具有较好的底物宽泛性，可识别丙酸、丁酸、2-甲基丙酸、戊酸、3-甲基丁酸、2-甲基丁酸以及环己甲酸等一系列单酸。反应最适温度为30 °C，最适pH为7.0。70 °C保温8 h后仍有45%的活性残留，表明该酶相对比较稳定。通过活性中心3个位点的定点突变可以改变酶的底物特异性。【结论】C. owensensis OL来源的酯酰辅酶A合成酶是潜在的生物催化剂，可以用于聚酮前体的合成。