A chemical cross-linking method for the analysis of binding partners of heat shock protein-90 in intact cells.
A chemical cross-linking method for the analysis of binding partners of heat shock protein-90 in intact cells.
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DOI：
10.2144/000113856
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发表时间：
2012-04
期刊：
影响因子：
2.7
通讯作者：
Bernier M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Song S;Kole S;Bernier M
热休克蛋白 90 (Hsp90) 家族的成员通过与多种蛋白质伙伴的动态相互作用，成为生物过程的关键调节因子。然而，这些相互作用的短暂性阻碍了 Hsp90 相互作用子的识别。我们表明，与乙二醇双（琥珀酰亚胺基琥珀酸酯）而不是较短的交联剂进行化学交联，在不同的细胞类型中产生了丰富的 240 kDa 分子伴侣 Hsp90 杂合物。药理学和遗传学方法的结合使用可以表征多聚蛋白复合物（称为 p240）的亚基组成和亚细胞区室化。 p240 的原位形成不需要 Hsp90 的 N 末端结构域或 ATP 酶活性。利用亚细胞分级分离技术和细胞不可渗透的交联剂，发现 p240 亚群同时存在于质膜和线粒体中。 Hsp90 相互作用蛋白，包括 Hsp70、p60Hop 和支架蛋白 filamin A，在控制 p240 的形成中没有作用。因此，化学交联与蛋白质组学方法相结合有可能解开 p240 复合物的蛋白质成分，更重要的是，可能提供一种扩大 Hsp90 相互作用组研究可用工具范围的方法。
Members of the heat shock protein-90 (Hsp90) family are key regulators of biological processes through dynamic interaction with a multitude of protein partners. However, the transient nature of these interactions hinders the identification of Hsp90 interactors. We show that chemical crosslinking with ethylene glycolbis(succinimidylsuccinate), but not shorter crosslinkers, generated an abundant 240-kDa heteroconjugate of the molecular chaperone Hsp90 in different cell types. The combined use of pharmacological and genetic approaches allowed the characterization of the subunit composition and subcellular compartmentalization of the multimeric protein complex, termed p240. The in situ formation of p240 did not require the N-terminal domain or the ATPase activity of Hsp90. Utilizing subcellular fractionation techniques and a cell-impermeant crosslinker, subpopulations of p240 were found to be present in both the plasma membrane and the mitochondria. The Hsp90-interacting proteins, including Hsp70, p60Hop and the scaffolding protein filamin A, had no role in governing the formation of p240. Therefore, chemical crosskinking combined with proteomic methods has the potential to unravel the protein components of this p240 complex and, more importantly, may provide an approach to expand the range of tools available to the study of the Hsp90 interactome.
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DOI：
10.1124/jpet.105.088088
发表时间：
2005-10-01
影响因子：
3.5
作者：
Carbone, DL;Doorn, JA;Petersen, DR
通讯作者：
Petersen, DR
影响因子：
5.3
作者：
Cheng, Chieh-Fang;Fan, Jianhua;Li, Wei
通讯作者：
Li, Wei
影响因子：
3.5
作者：
Falsone, SF;Gesslbauer, B;Kungl, AJ
通讯作者：
Kungl, AJ
影响因子：
11.2
作者：
Lagarrigue, Frederic;Dupuis-Coronas, Sophie;Gaits-Iacovoni, Frederique
通讯作者：
Gaits-Iacovoni, Frederique
影响因子：
4.8
作者：
Sidera, Katerina;Gaitanou, Maria;Patsavoudi, Evangelia
通讯作者：
Patsavoudi, Evangelia