Structural models of mitochondrial uncoupling proteins obtained in DPC micelles are not functionally relevant
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DPC 胶束中获得的线粒体解偶联蛋白的结构模型在功能上不相关
DOI：
--
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发表时间：
2020
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
B. Miroux
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Mathilde S. Piel;S. Masscheleyn;F. Bouillaud;K. Moncoq;B. Miroux
解偶联蛋白1（UCP 1）存在于棕色脂肪细胞的线粒体内膜中。在长链脂肪酸（LCFA）的存在下，UCP 1增加质子电导，这反过来又增加了脂肪酸的氧化和能量释放。UCP 1和UCP 2的原子模型已经基于十二烷基磷酸胆碱（DPC）中UCP 2的NMR骨架结构产生，DPC是一种已知的可抑制UCP 1的去污剂。基于用LCFA对UCP 1的NMR滴定实验，已经提出K56和K269对于LCFA结合和UCP 1活化是至关重要的。鉴于使用DPC的膜蛋白的结构-功能分析的众多争议，我们重新审视这些UCP 1突变体在更生理的情况下，通过表达它们在线粒体的酿酒酵母。线粒体呼吸，测定透性化的原生质球，使UCP 1的激活和抑制的测定。K56 S、K269 S和K56 S/K269 S突变体在活化中未显示任何缺省，这表明DPC洗涤剂中的NMR滴定实验与UCP 1功能无关。
Uncoupling protein 1 (UCP1) is found in the inner mitochondrial membrane of brown adipocytes. In the presence of long‐chain fatty acids (LCFAs), UCP1 increases the proton conductance, which, in turn, increases fatty acid oxidation and energy release as heat. Atomic models of UCP1 and UCP2 have been generated based on the NMR backbone structure of UCP2 in dodecylphosphocholine (DPC), a detergent known to inactivate UCP1. Based on NMR titration experiments on UCP1 with LCFA, it has been proposed that K56 and K269 are crucial for LCFA binding and UCP1 activation. Given the numerous controversies on the use of DPC for structure–function analyses of membrane proteins, we revisited those UCP1 mutants in a more physiological context by expressing them in the mitochondria of Saccharomyces cerevisiae. Mitochondrial respiration, assayed on permeabilized spheroplasts, enables the determination of UCP1 activation and inhibition. The K56S, K269S, and K56S/K269S mutants did not display any default in activation, which shows that the NMR titration experiments in DPC detergent are not relevant to UCP1 function.
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