异体小鼠脂肪源性间充质干细胞-微孔化羊脱细胞真皮基质对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及相关机制
异体小鼠脂肪源性间充质干细胞-微孔化羊脱细胞真皮基质对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及相关机制
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DOI：
10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2018.12.015
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发表时间：
2018
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
郝春光
中科院分区：
文献类型：
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作者：
曹胜军;王凌峰;巴特;符雪;李芳;郝春光
目的探讨异体小鼠脂肪源性间充质干细胞(ADSC)-微孔化羊脱细胞真皮基质(ADM)对小鼠全层皮肤缺损创面愈合的影响及相关机制。方法取1只昆明小鼠,断颈处死后取腹股沟处脂肪组织,体外分离培养小鼠ADSC,取第3代细胞行细胞成脂、成骨诱导分化鉴定,采用流式细胞仪检测CD34、CD73、CD90、CD105的表达。取I只绵羊,宰杀后取背部皮肤,脱细胞处理和冻融法制备微孔化羊ADM。取36只昆明小鼠,均在背部制备1个直径为12 mm的圆形全层皮肤缺损创面,以微孔化羊ADM覆盖创面。术后将小鼠按随机数字表法分为ADSC组和对照组,每组18只。将0.2 mL的悬浮有1 × 10~6个ADSC的DMEM/F12培养液注入ADSC组小鼠微孔化羊ADM与创面之间,将0.2 mL的DMEM/F12培养液注入对照组小鼠微孔化羊ADM与创面之间。术后12、17 d,计算2组小鼠创面愈合率;术后7、12、17 d,背光反向照射下观察2组小鼠创面血管生长情况;术后7、12、17 d,行苏木素-伊红染色观察ADSC组小鼠创面肉芽组织,并于术后7 d测量2组小鼠创面肉芽组织厚度;术后12、17 d,采用免疫组织化学法检测2组小鼠创面血管内皮生长因子(VEGF)表达。以上实验中各组各时间点样本数均为6。对数据行t检验、析因设计方差分析。结果(1)成脂诱导7 d,经油红0染色细胞质可见红色小油滴;成骨诱导21 d,硝酸银染色培养基内可见黑色的钙盐沉积。细胞CD73、CD90、CD105、CD34表达率分别为97.82% 、99.32% 、97.35%、5.88%。细胞鉴定为ADSC。(2)术后12、17 d, ADSC组创面愈合率[(78 ±6)%、(98 ± 3)% ]均高于对照组[(60 ±9)%、(90 ±4)%, t =4.26、4.46, P <0.01]。(3)术后7 d,2组小鼠都无明显的向创面中心生长的血管,但ADSC组的创面肉芽组织已全部覆盖创面;术后12 d, ADSC组小鼠创面比对照组血管更加丰富;术后17 d,ADSC组小鼠创面可见粗大的血管且贯穿整个创面,对照组也可见粗大的血管生成,但未贯穿创面。(4)ADSC组小鼠术后7 d创面已经覆盖肉芽组织但较薄,术后12 d肉芽组织明显增厚,术后17 d肉芽组织已被表皮覆盖。术后7 d,ADSC组小鼠创面肉芽组织厚度为(0.62±0.05)mm,明显厚于对照组的(0.31 ±0.04)mm, t =12.27, P <0.01。(5)术后12、17 d, ADSC组小鼠创面VEGF的表达[(80.7 ±2.2)、(102.8±2.6)个/mm~2]均高于对照组[(59.5 ±2.4)、(81.5 ±2.6)个/mm~2, t = 15.95、14.14, P <0.01]。结论异体小鼠ADSC-微孔化羊ADM可促进小鼠全层皮肤缺损创面的血管生成和肉芽组织生长,加速创面愈合,其机制可能与增加VEGF表达相关。