Imaging Single mRNA Molecules in Mammalian Cells Using an Optimized MS2-MCP System.
Imaging Single mRNA Molecules in Mammalian Cells Using an Optimized MS2-MCP System.
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使用优化的 MS2-MCP 系统对哺乳动物细胞中的单个 mRNA 分子进行成像。
DOI：
10.1007/978-1-4939-9674-2_1
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发表时间：
2019
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Singer,RobertH
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Vera,Maria;Tutucci,Evelina;Singer,RobertH
单个mRNAs在其天然细胞环境中的可视化为研究基因表达调控提供了关键信息。这一基本的生物学问题引发了MS2-MCP(MS2-衣壳蛋白)系统的发展，该系统可以标记mRNAs并使用宽视场荧光显微镜对其生命周期进行成像。在过去的二十年里，已经朝着改善MS2-MCP系统的质量和数量特征的方向发展。在这里，我们提供了一个使用最新版本MS2V6和MS2V7来标记和可视化培养中哺乳动物细胞中的mRNAs的协议。设计MS2V6和MS2V7背后的动机是克服观察到的降级警告。Cerevisiae与以前的MS2-MCP系统进行比较。而对于酵母，我们建议使用MS2V6，我们发现，对于哺乳动物细胞的活细胞成像实验，MS2V7具有更好的报告特性。
Visualization of single mRNAs in their native cellular environment provides key information to study gene expression regulation. This fundamental biological question triggered the development of the MS2-MCP (MS2-Capsid Protein) system to tag mRNAs and image their life cycle using widefield fluorescence microscopy. The last two decades have evolved toward improving the qualitative and quantitative characteristics of the MS2-MCP system. Here, we provide a protocol to use the latest versions, MS2V6 and MS2V7, to tag and visualize mRNAs in mammalian cells in culture. The motivation behind engineering MS2V6 and MS2V7 was to overcome a degradation caveat observed inS. cerevisiae with the previous MS2-MCP systems. While for yeast we recommend the use of MS2V6, we found that for live-cell imaging experiments in mammalian cells, the MS2V7 has improved reporter properties.
影响因子：
11.1
作者：
Vera M;Biswas J;Senecal A;Singer RH;Park HY
通讯作者：
Park HY
影响因子：
16
作者：
Bertrand, E;Chartrand, P;Long, RM
通讯作者：
Long, RM
影响因子：
10.5
作者：
Katz, Zachary B.;Wells, Amber L.;Singer, Robert H.
通讯作者：
Singer, Robert H.