GONAD: Genome-editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery system: a novel microinjection independent genome engineering method in mice.
GONAD: Genome-editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery system: a novel microinjection independent genome engineering method in mice.
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DOI：
10.1038/srep11406
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发表时间：
2015-06-22
影响因子：
4.6
通讯作者：
Ohtsuka M
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Takahashi G;Gurumurthy CB;Wada K;Miura H;Sato M;Ohtsuka M
显微注射被认为是将核酸（NA；转基因或基因组编辑工具，如 CRISPR/Cas9 系统）输送到胚胎中以创建转基因生物的黄金标准技术。执行微注射技术需要精密的设备以及训练有素和高技能的人员。在这里，我们描述了一种新颖且简单的独立于显微注射的技术，称为通过输卵管核酸传递进行基因组编辑（GONAD）。使用 GONAD，我们证明 NA（例如，eGFP mRNA 或 Cas9 mRNA/sgRNA）可以通过简单的电穿孔方法有效地递送至完整小鼠输卵管内的植入前胚胎，并在胚胎中产生所需的遗传修饰。因此，GONAD 可以绕过转基因技术中的许多复杂步骤，例如分离受精卵、将 NA 显微注射到其中，以及随后将其转移到假怀孕动物中。此外，该方法还可用于小鼠以外物种的基因组编辑。
Microinjection is considered the gold standard technique for delivery of nucleic acids (NAs; transgenes or genome editing tools such as CRISPR/Cas9 systems) into embryos, for creating genetically modified organisms. It requires sophisticated equipment as wel as well-trained and highly skilled personnel to perform the micro-injection technique. Here, we describe a novel and simple microinjection-independent technique, called Genome-editing via Oviductal Nucleic Acids Delivery (GONAD). Using GONAD, we show that NAs (e.g., eGFP mRNA or Cas9 mRNA/sgRNAs) can be effectively delivered to pre-implantation embryos within the intact mouse oviduct by a simple electroporation method, and result in the desired genetic modification in the embryos. Thus GONAD can bypass many complex steps in transgenic technology such as isolation of zygotes, microinjection of NAs into them, and their subsequent transfer to pseudo-pregnant animals. Furthermore, this method can potentially be used for genome editing in species other than mice.
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