A new protein-protein interaction sensor based on tripartite split-GFP association.
A new protein-protein interaction sensor based on tripartite split-GFP association.
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DOI：
10.1038/srep02854
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发表时间：
2013-10-04
影响因子：
4.6
通讯作者：
Waldo, Geoffrey S.
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Cabantous, Stephanie;Nguyen, Hau B.;Pedelacq, Jean-Denis;Koraichi, Faten;Chaudhary, Anu;Ganguly, Kumkum;Lockard, Meghan A.;Favre, Gilles;Terwilliger, Thomas C.;Waldo, Geoffrey S.
监测活细胞中的蛋白质-蛋白质相互作用是揭示它们在许多细胞过程和各种疾病中的作用的关键。先前描述的基于分裂gfp的传感器具有较差的折叠和/或自组装背景荧光。在这里，我们设计了一个微标记系统来监测体内和体外的蛋白质-蛋白质相互作用。该分析是基于两个20个氨基酸长的GFP标签GFP10和GFP11之间的三方关联，融合到相互作用的蛋白质伴侣，以及互补的GFP1-9检测器。当蛋白质相互作用时，GFP10和GFP11与GFP1-9自结合以重建功能性GFP。利用线圈和FRB/FKBP12模型系统，我们在体外和大肠杆菌中对传感器进行了表征。我们将研究扩展到哺乳动物细胞，并检测FK-506对雷帕霉素诱导的FRB/FKBP12关联的抑制作用。这些标签的小尺寸及其对融合蛋白行为和溶解度的最小影响应该使荧光监测蛋白-蛋白关联的新实验成为可能。
Monitoring protein-protein interactions in living cells is key to unraveling their roles in numerous cellular processes and various diseases. Previously described split-GFP based sensors suffer from poor folding and/or self-assembly background fluorescence. Here, we have engineered a micro-tagging system to monitor protein-protein interactions in vivo and in vitro. The assay is based on tripartite association between two twenty amino-acids long GFP tags, GFP10 and GFP11, fused to interacting protein partners, and the complementary GFP1-9 detector. When proteins interact, GFP10 and GFP11 self-associate with GFP1-9 to reconstitute a functional GFP. Using coiled-coils and FRB/FKBP12 model systems we characterize the sensor in vitro and in Escherichia coli. We extend the studies to mammalian cells and examine the FK-506 inhibition of the rapamycin-induced association of FRB/FKBP12. The small size of these tags and their minimal effect on fusion protein behavior and solubility should enable new experiments for monitoring protein-protein association by fluorescence.
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DOI：
10.1093/protein/gzr021
发表时间：
2011-07
期刊：
Protein engineering, design & selection : PEDS
影响因子：
--
作者：
Lockard MA;Listwan P;Pedelacq JD;Cabantous S;Nguyen HB;Terwilliger TC;Waldo GS
通讯作者：
Waldo GS
影响因子：
46.9
作者：
Galarneau, A;Primeau, M;Michnick, SW
通讯作者：
Michnick, SW
影响因子：
15
作者：
Magliery, TJ;Wilson, CGM;Regan, L
通讯作者：
Regan, L
影响因子：
14.9
作者：
Pedelacq, Jean-Denis;Nguyen, Hau B.;Waldo, Geoffrey S.
通讯作者：
Waldo, Geoffrey S.
DOI：
10.1073/pnas.94.16.8405
发表时间：
1997-08-05
影响因子：
11.1
作者：
Rossi, F;Charlton, CA;Blau, HM
通讯作者：
Blau, HM