Comprehensive engineering of Escherichia coli for enhanced expression of IgG antibodies.
Comprehensive engineering of Escherichia coli for enhanced expression of IgG antibodies.
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DOI：
10.1016/j.ymben.2010.11.002
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发表时间：
2011-03
影响因子：
8.4
通讯作者：
Georgiou, George
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Makino, Tomohiro;Skretas, Georgios;Kang, Tae-Hyun;Georgiou, George
关键词：
在大肠杆菌中表达IgG抗体对于分析和治疗应用越来越感兴趣。在这项工作中，我们描述了一个全面和系统的方法，以发展一个双顺反子表达系统，提高IgG在E。大肠杆菌，包括：（i）使用流式细胞术进行随机诱变和高通量筛选以分离过表达菌株，和（ii）通过筛选第二顺反子（重链）5'区中的同义密码子文库来优化翻译起始。研究了不同启动子和分子伴侣共表达对全长IgG产生的影响。优化的系统导致完全组装的IgG的可靠表达，对于不同的抗体，产率在1和4 mg/升摇瓶培养物之间。
The expression of IgG antibodies in Escherichia coli is of increasing interest for analytical and therapeutic applications. In this work, we describe a comprehensive and systematic approach to the development of a dicistronic expression system for enhanced IgG expression in E. coli encompassing: (i) random mutagenesis and high-throughput screening for the isolation of overexpressing strains using flow cytometry, and (ii) optimization of translation initiation via the screening of libraries of synonymous codons in the 5’ region of the second cistron (heavy chain). The effects of different promoters and co-expression of molecular chaperones on full-length IgG production were also investigated. The optimized system resulted in reliable expression of fully assembled IgG at yields between 1 and 4 mg/liter of shake flask culture for different antibodies.
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