Multiparameter RNA and codon optimization: a standardized tool to assess and enhance autologous mammalian gene expression.
Multiparameter RNA and codon optimization: a standardized tool to assess and enhance autologous mammalian gene expression.
复制标题
DOI：
10.1371/journal.pone.0017596
复制
发表时间：
2011-03-03
期刊：
影响因子：
3.7
通讯作者：
Wagner R
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Fath S;Bauer AP;Liss M;Spriestersbach A;Maertens B;Hahn P;Ludwig C;Schäfer F;Graf M;Wagner R
用于生物医学研究和产品开发的重组人蛋白在人类细胞中的自体表达经常受到低表达产率的阻碍，从而限制了后续的结构和功能分析。经过RNA和密码子优化后，代表人类五类蛋白质-转录因子、核糖体和聚合酶亚单位、蛋白激酶、膜蛋白和免疫调节剂-的50个候选基因都显示出可靠的表达，86%的基因甚至表达上调。对三个有代表性的例子的分析表明，对蛋白质的溶解性没有不利影响，而使用优化的结构，JNK1、JNK3和CDC2的功能没有改变。对序列优化的转基因的分子分析表明，在转录、翻译和mRNA稳定水平上都有积极的影响。由于改进后的表达在HEK293T、CHO和昆虫细胞中一致，因此它并不局限于不同的哺乳动物细胞系统。此外，优化的基因代表着功能基因组学中的强大工具，正如使用序列优化的对应物成功挽救siRNA介导的击倒所证明的那样。这是首次大规模研究多参数优化对自体人类蛋白质表达的影响。
Autologous expression of recombinant human proteins in human cells for biomedical research and product development is often hampered by low expression yields limiting subsequent structural and functional analyses. Following RNA and codon optimization, 50 candidate genes representing five classes of human proteins – transcription factors, ribosomal and polymerase subunits, protein kinases, membrane proteins and immunomodulators – all showed reliable, and 86% even elevated expression. Analysis of three representative examples showed no detrimental effect on protein solubility while unaltered functionality was demonstrated for JNK1, JNK3 and CDC2 using optimized constructs. Molecular analysis of a sequence-optimized transgene revealed positive effects at transcriptional, translational, and mRNA stability levels. Since improved expression was consistent in HEK293T, CHO and insect cells, it was not restricted to distinct mammalian cell systems. Additionally, optimized genes represent powerful tools in functional genomics, as demonstrated by the successful rescue of an siRNA-mediated knockdown using a sequence-optimized counterpart. This is the first large-scale study addressing the influence of multiparameter optimization on autologous human protein expression.
登录
查看更多内容
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1992.tb17271.x
发表时间：
1992-10-01
期刊：
EUROPEAN JOURNAL OF BIOCHEMISTRY
影响因子：
--
作者：
IVANOV, IG;ALEXANDROVA, R;ABOUHAIDAR, MG
通讯作者：
ABOUHAIDAR, MG
影响因子：
14.9
作者：
Bauer AP;Leikam D;Krinner S;Notka F;Ludwig C;Längst G;Wagner R
通讯作者：
Wagner R
影响因子：
5.8
作者：
Leclerc GJ;Leclerc GM;Barredo JC
通讯作者：
Barredo JC
DOI：
10.1111/j.1550-7408.1991.tb04814.x
发表时间：
1991-09-01
期刊：
JOURNAL OF PROTOZOOLOGY
影响因子：
--
作者：
KINK, JA;MALEY, ME;KUNG, C
通讯作者：
KUNG, C
影响因子：
5.4
作者：
FURTH, PA;BAKER, CC
通讯作者：
BAKER, CC