Purification and characterization of a novel broad‐specificity (α1 → 2, α1 → 3 and α1 → 6) mannosidase from rat liver
Purification and characterization of a novel broad‐specificity (α1 → 2, α1 → 3 and α1 → 6) mannosidase from rat liver
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大鼠肝脏中新型广泛特异性（α1 → 2、α1 → 3 和 α1 → 6）甘露糖苷酶的纯化和表征
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1991.tb15903.x
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发表时间：
1991
期刊：
影响因子：
5.4
通讯作者：
R. Hughes
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
P. Bonay;R. Hughes
我们已经在大鼠肝脏中鉴定了一种甘露糖苷酶，其从寡糖底物MannGlcNAc（其中n= 4-9）释放α1 2、α1 3和α1 6连接的甘露糖残基。反应的最终产物为Manα1 3[Manα1 6]Manβ1 4GlcNAc。甘露糖苷酶已被纯化到同质从大鼠肝微粒体部分，溶解到Triton X-114的水相后，通过阴离子交换，疏水和羟基磷灰石色谱，然后通过色谱聚焦。纯化的酶是110-kDa亚基的二聚体，最佳pH值在6.1至6.5之间，对于Man 5GlcNAc-低聚糖或Man 9 GlcNAc-低聚糖底物的Km分别为65 μM和110 μM。酶活性被EDTA抑制，被Zn 2+和Cu 2+抑制，并且在较小程度上被Fe 2+抑制，并且被Co 2+稳定。甘露糖残基从Man 6 GlcNAc底物中释放的模式显示α1 2连接残基的有序水解，然后是α1 3和α1 6连接残基的水解。纯化的酶对对硝基苯基-α-甘露糖苷和杂合GlcNAc Man 5GlcNAc寡糖均无活性。该酶活性被苦马豆素和1-脱氧甘露尻霉素抑制，其浓度分别比完全抑制Golgimannosidase II和甘露糖苷酶I所需的浓度高50-500倍。这些数据强烈地表明，该酶具有新的活性，并且不同于先前描述的甘露聚糖酶。
We have identified a mannosidase in rat liver that releases α1 2, α1 3 and α1 6 linked manose residues from oligosaccharide substrates, MannGlcNAc where n= 4–9. The end product of the reaction is Manα1 3[Manα1 6]Manβ1 4GlcNAc. The mannosidase has been purified to homogeneity from a rat liver microsomal fraction, after solubilization into the aqueous phase of Triton X-114, by anion-exchange, hydrophobic and hydroxyapatite chromatography followed by chromatofocusing. The purified enzyme is a dimer of a 110-kDa subunit, has a pH optimum between 6.1 and 6.5 and a Km of 65 μM and 110 μM for the Man5GlcNAc-oligosaccharide or Man9GlcNAc-oligosaccharide substrates, respectively. Enzyme activity is inhibited by EDTA, by Zn2+ and Cu2+, and to lesser extent by Fe2+ and is stabilized by Co2+. The pattern of release of mannose residues from a Man6GlcNAc substrate shows an ordered hydrolysis of the α1 2 linked residue followed by hydrolysis of α1 3 and α1 6 linked residues. The purified enzyme shows no activity against p-nitrophenyl-α-mannoside nor the hybrid GlcNAc Man5GlcNAc oligosaccharide. The enzyme activity is inhibited by swainsonine and 1-deoxymannojirimycin at concentrations 50–500-fold higher than required for complete inhibition of Golgimannosidase II and mannosidase I, respectively. The data indicate strongly that the enzyme has novel activity and is distinct from previously described mannosidases.
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