Signal amplification in HL‐60 granulocytes
Signal amplification in HL‐60 granulocytes
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HL-60 粒细胞中的信号放大
DOI：
10.1111/j.1432-1033.1991.tb15964.x
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发表时间：
1991
期刊：
影响因子：
5.4
通讯作者：
K. Jakobs
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
P. Gierschik;R. Moghtader;C. Straub;K. Dieterich;K. Jakobs
趋化肽 fMet-Leu-Phe（fMet，N-甲酰甲硫氨酸）的受体存在于骨髓分化的人白血病 (HL-60) 细胞膜中，并通过百日咳毒素敏感的鸟嘌呤核苷酸结合调节蛋白 [G 蛋白] 刺激磷脂酶 C。我们开发了评估甲酰基肽受体刺激的放射性标记鸟苷 5'-[γ-硫代]三磷酸 ([35S]GTP[S]) 与天然 HL-60 膜结合的方法。当 GTP[S] 是培养介质中存在的唯一核苷酸时，[35S]GTP[S] 与膜结合的激动剂刺激最小 (20%)。相反，当 GDP 或 GTP 以高（> 100 倍）过量的 [35S]GTP[S] 存在时，受体激活会导致 [35S]GTP[S] 结合显着（高达六倍）刺激。趋化激动剂引起的[35S]GTP[S]结合的增加严格依赖于Mg2+的存在，并且Na+显着增加。百日咳和霍乱毒素均显着减弱[35S]GTP[S]的激动剂独立结合以及趋化激动剂引起的增加。趋化肽敏感的 [35S]GTP[S] 结合位点的数量与 HL-60 膜中存在的趋化肽受体的数量的比较提供了直接证据，表明单个甲酰基肽受体能够催化 [35S]GTP[S] 与天然质膜中的多个（最多 20 个）G 蛋白结合，从而激活多个（最多 20 个）G 蛋白。
Receptors for the chemotactic peptide fMet-Leu-Phe (fMet, N-formylmethionine) are present in membranes of myeloid differentiated human leukemia (HL-60) cells and stimulate phospholipase C via a pertussis-toxin-sensitive guanine-nucleotide-binding regulatory protein(s) [G-protein(s)]. We have developed methods for the assessment of formyl-peptide-receptor-stimulated binding of radiolabeled guanosine 5′-[γ-thio]triphosphate ([35S]GTP[S]) to native HL-60 membranes. Agonist stimulation of [35S]GTP[S] association with the membrane was minimal ( 20%) when GTP[S] was the sole nucleotide present in the incubation medium. In contrast, receptor activation led to a marked (up to sixfold) stimulation of [35S]GTP[S] binding when GDP or GTP were present in high (> 100-fold) excess of [35S]GTP[S]. The increase in [35S]GTP[S] binding caused by the chemotactic agonist was strictly dependent on the presence of Mg2+ and was significantly increased by Na+. Agonist-independent binding of [35S]GTP[S] and the increase due to the chemotactic agonist were markedly attenuated by both pertussis and cholera toxin. Comparision of the number of chemotactic-peptide-sensitive [35S]GTP[S]-binding sites to the number of chemotactic peptide receptors present in HL-60 membranes provided direct evidence that a single formyl-peptide receptor is capable of catalyzing the binding of [35S]GTP[S] to, and thus the activation of, multiple (up to 20) G-proteins in native plasma membranes.
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