Characterization of cDNA clone encoding the matrix metalloproteinase 2 from rainbow trout fibroblast
Characterization of cDNA clone encoding the matrix metalloproteinase 2 from rainbow trout fibroblast
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编码虹鳟成纤维细胞基质金属蛋白酶 2 的 cDNA 克隆的表征
DOI：
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发表时间：
2000
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
S. Kimura
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
M. Saito;N. Kunisaki;N. Urano;S. Kimura
摘要：
基质金属蛋白酶广泛存在于脊椎动物组织中。高等脊椎动物的明胶酶之一是明胶酶-2，又称明胶酶A或72 kDa IV型胶原酶，它能有效地裂解变性的胶原蛋白、IV型胶原、V型胶原和其他基质蛋白。为了研究低等脊椎动物硬骨鱼中基质金属蛋白酶-2的一级结构和性质，从虹鱼成纤维细胞的mRNA中制备了一个cDNA文库，并进行了筛选。利用针对高等脊椎动物线粒体膜中发现的两个高度保守序列的聚合酶链式反应和简并寡核苷酸引物，将合成的cDNA片段用作探针。克隆了一个3.0kb的克隆，该克隆含有一个编码655个氨基酸的多肽的开放阅读框。该多肽与人原基质金属蛋白酶-2在氨基酸水平上的同源性为73%，其中在前肽和催化区的相似性最大，命名为虹鲑原基质金属蛋白酶-2。在大肠杆菌中表达的重组蛋白能够降解明胶和人的V型胶原蛋白，从而支持了该基因编码真虹鱼proMMP2的假说。与人前基质金属蛋白酶-2不同的是，4-氨基苯基汞醋酸酯不能激活虹鱼原基质金属蛋白酶-2。这是我们所知的第一个关于FISH ProMMPs的cDNA的报道。
SUMMARY:
Matrix metalloproteinases (MMP) are widely distributed in vertebrate tissues. One of the well-characterized gelatinases from higher vertebrates is MMP-2, named gelatinase A or 72 kDa type IV collagenase, which is active for the cleavage of denatured collagens, type IV collagen, type V collagen, and other matrix proteins. To investigate the primary structure and properties of MMP-2 from teleost as lower vertebrates, a cDNA library was prepared from mRNA of rainbow trout fibroblast and screened. Using polymerase chain reaction and degenerate oligonucleotide primers, which are specific for two highly conserved sequences found in MMP of higher vertebrates, a resultant cDNA fragment was used as a probe. A cDNA clone 3.0 kb long was isolated and found to contain an open-reading frame coding for a polypeptide of 655 amino acids. The rainbow trout polypeptide was 73% identical, at the level of amino acid sequence, to human proMMP-2 with the greatest degree of similarity occurring in the propeptide and catalytic domains and was denoted as rainbow trout proMMP-2. Then the isolated cDNA was expressed in Escherichia coli and the recombinant protein was found to degrade gelatin and human type V collagen, providing support to the hypothesis that the cDNA codes for the authentic rainbow trout proMMP-2. In contrast to human proMMP-2, rainbow trout proMMP-2 was not activated by 4-amino-phenylmercuric acetate. This is the first report of cDNA for fish proMMP to our knowledge.
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鼠 72-kDa IV 型胶原酶的分子克隆及其在小鼠发育过程中的表达。
DOI：
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发表时间：
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通讯作者：
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