Multiplex imaging of Rho family GTPase activities in living cells.
Multiplex imaging of Rho family GTPase activities in living cells.
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活细胞中 Rho 家族 GTP 酶活性的多重成像。
DOI：
10.1007/978-1-61779-442-1_15
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发表时间：
2012
期刊：
影响因子：
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通讯作者：
Hodgson,Louis
中科院分区：
文献类型：
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作者：
Spiering,Desiree;Hodgson,Louis
在这里，我们提供了在单一和多路采集模式下对Rho GTP酶生物传感器进行成像的程序。这种多路传输的方法可以直接显示单个活细胞中的两个生物传感器读数。这里，我们以基于CFP/YFP FRET模式的RhoA生物传感器和基于有机染料的CDC42生物传感器的组合为例，该生物传感器随着局部溶剂的极性而改变荧光。我们列出了在单个活细胞中成功成像这两个比率生物传感器所需的光学元件以及细胞操纵技术。
Here, we provide procedures for imaging the Rho GTPase biosensors in both single and multiplex acquisition modes. The multiplex approach enables the direct visualization of two biosensor readouts from a single living cell. Here, we take as an example a combination of the RhoA biosensor based on a CFP/YFP FRET modality and the Cdc42 biosensor based on organic dyes that change fluorescence as a function of the local solvent polarity. We list the required optical components as well as cellular manipulation techniques necessary to successfully image these two ratiometric biosensors in a single living cell.