Detection of free fatty acid receptor 1 expression: the critical role of negative and positive controls
Detection of free fatty acid receptor 1 expression: the critical role of negative and positive controls
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游离脂肪酸受体 1 表达的检测：阴性和阳性对照的关键作用
DOI：
10.1007/s00125-014-3161-8
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发表时间：
2014
期刊：
影响因子：
8.2
通讯作者：
Ullrich S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Teutsch CA;Panse M;Grundmann M;Kaiser G;Kostenis E;Häring HU;Ullrich S
目的/假设对蛋白质表达的充分评估是功能研究的重要先决条件。常用的策略包括使用蛋白质印迹和免疫组织化学染色通过特异性抗体检测蛋白质，或通过原位杂交和 RT-PCR 检测 mRNA。我们评估了检测游离脂肪酸受体 1 (FFAR1) 表达的工具。方法使用市售抗体制剂来检测 FFAR1 受体的内源表达，并将其与缺乏或过度表达小鼠或人类受体的细胞制剂进行比较。 RT-PCR检测mRNA浓度。结果所有胰岛素分泌细胞、INS-1E、Min6和小鼠胰岛均在mRNA水平上表现出Ffar1的特异性表达。然而，没有一种市售抗体能够特异性检测大鼠、小鼠或人 FFAR1。结论/解释正确的阳性和阴性对照是评估 FFAR1 表达的重要先决条件。
Aims/hypothesisAdequate evaluation of protein expression is a crucial prerequisite for functional studies. Commonly used strategies comprise detection of proteins by specific antibodies using western blotting and immunohistochemical staining, or detection of mRNA by in situ hybridisation and RT-PCR. We evaluated the tools for the detection of free fatty acid receptor 1 (FFAR1) expression.MethodsCommercially available antibody preparations were used to detect endogenous expression of the FFAR1 receptor and this was compared with cell preparations deficient or overexpressing the mouse or human receptor. Concentrations of mRNA were evaluated by RT-PCR.ResultsAll insulin-secreting cells, INS-1E, Min6 and mouse islets showed specific expression ofFfar1at the mRNA level. However, none of the commercially available antibodies specifically detected rat, mouse or human FFAR1.Conclusions/interpretationProper positive and negative controls are an important prerequisite for the evaluation of FFAR1 expression.
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