CRISPR/Cas9-mediated gene knockout in the ascidian Ciona intestinalis.
CRISPR/Cas9-mediated gene knockout in the ascidian Ciona intestinalis.
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DOI：
10.1111/dgd.12149
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发表时间：
2014-09
期刊：
影响因子：
--
通讯作者：
Sasakura Y
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Sasaki H;Yoshida K;Hozumi A;Sasakura Y
使用 CRISPR/Cas9 敲除基因是一种新出现的研究各种生物体中基因功能的方法。我们证明 CRISPR/Cas9 可以突变海鞘海鞘的内源基因，海鞘海鞘是阐明构建脊索动物身体计划的分子机制的绝佳模型。当短向导RNA（sgRNA）和Cas9 mRNA通过其表达载体的显微注射或电穿孔在Ciona胚胎中表达时，会在靶基因中引入突变。与其他一些生物体的报道相比，sgRNA选择靶标的特异性相对较高，并且sgRNA的单核苷酸突变显着降低了靶位点的突变效率。 CRISPR/Cas9 介导的诱变将与另一种使用 TALE 核酸酶的基因组编辑方法一起成为研究 Ciona 基因功能的强大方法。
Knockout of genes with CRISPR/Cas9 is a newly emerged approach to investigate functions of genes in various organisms. We demonstrate that CRISPR/Cas9 can mutate endogenous genes of the ascidian Ciona intestinalis, a splendid model for elucidating molecular mechanisms for constructing the chordate body plan. Short guide RNA (sgRNA) and Cas9 mRNA, when they are expressed in Ciona embryos by means of microinjection or electroporation of their expression vectors, introduced mutations in the target genes. The specificity of target choice by sgRNA is relatively high compared to the reports from some other organisms, and a single nucleotide mutation at the sgRNA dramatically reduced mutation efficiency at the on-target site. CRISPR/Cas9-mediated mutagenesis will be a powerful method to study gene functions in Ciona along with another genome editing approach using TALE nucleases.
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