In vitro activation and inhibition of recombinant EGFR tyrosine kinase expressed in Escherichia coli.
In vitro activation and inhibition of recombinant EGFR tyrosine kinase expressed in Escherichia coli.
复制标题
DOI：
10.1155/2013/807284
复制
发表时间：
2013
影响因子：
--
通讯作者：
Aifa S
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Elloumi-Mseddi J;Jellali K;Aifa S
目前的工作涉及表皮生长因子受体（EGFR）的酪氨酸激酶活性的胞内结构域的异源表达。由于缺失了近膜区（JM）的一个13个氨基酸的肽，蛋白质表达得到了改善。重组蛋白在大肠杆菌中以谷胱甘肽s -转移酶（GST）融合产生，提取过程中加入萨科齐酶进行溶解。在[γ-32P]ATP存在的情况下，产生的蛋白质自发二聚化，从而激活酪氨酸激酶结构域。活性分析显示，在染料木素的存在下，EGFR蛋白的自磷酸化降低。我们的系统可以促进EGFR抑制剂的筛选，而不需要添加外源底物。
The present work concerns the heterologous expression of the intracellular domain harbouring the tyrosine kinase activity of the epidermal growth factor receptor (EGFR). Protein expression was improved thanks to the deletion of a 13-amino acid peptide of the juxtamembrane region (JM). The recombinant proteins were produced as a glutathione S-transferase (GST) fusion in Escherichia coli, and the solubilisation was performed by sarkosyl addition during extraction. The produced proteins spontaneously dimerize allowing the activation of the tyrosine kinase domain in the presence of [γ-32P]ATP. The activity assay has revealed the autophosphorylation of EGFR proteins which was decreased in the presence of genistein. Our system could facilitate the screening of EGFR inhibitors without the need of adding an exogenous substrate.
登录
查看更多内容
影响因子：
4.8
作者：
Inouye, K;Mizutani, S;Kaziro, Y
通讯作者：
Kaziro, Y
DOI：
10.1016/0006-291x(90)91915-f
发表时间：
1990-01-15
影响因子：
3.1
作者：
KOLAND, JG;OBRIEN, KM;CERIONE, RA
通讯作者：
CERIONE, RA
影响因子：
21.3
作者：
Lin, SY;Makino, K;Hung, MC
通讯作者：
Hung, MC
影响因子：
3.7
作者：
Aifa, S;Aydin, J;Hermanson, O
通讯作者：
Hermanson, O
影响因子：
2.9
作者：
Martín-Nieto, J;Villalobo, A
通讯作者：
Villalobo, A