Production of recombinant tau oligomers in vitro.
Production of recombinant tau oligomers in vitro.
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DOI：
10.1016/bs.mcb.2017.06.005
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发表时间：
2017
影响因子：
--
通讯作者：
Kanaan NM
中科院分区：
文献类型：
--
作者：
Combs B;Tiernan CT;Hamel C;Kanaan NM
tau 蛋白的病理性聚集是许多神经退行性疾病的共同特征。人们对表征 tau 寡聚物的潜在毒性有着浓厚的兴趣。这些非原纤维、可溶性多聚体似乎比由丝状 tau 蛋白组成的神经原纤维缠结更具毒性。然而，tau 寡聚物的可靠生产、纯化和验证可能会带来一定的挑战。在这里，我们提供了一系列解决这些问题的方法。首先，使用大肠杆菌生产重组 tau，通过亲和层析、尺寸排阻层析和阴离子交换层析步骤进行纯化，并使用 SDS Lowry 蛋白定量测定进行定量。使用花生四烯酸诱导 tau 蛋白聚集，并通过蔗糖梯度离心纯化低聚物。最后，我们描述了一种夹心酶联免疫吸附测定，利用 tau 寡聚体特异性 TOC1 抗体来确认寡聚 tau 的存在。这些步骤共同提供了一种非常简单且可靠的方法来生产可用于下游应用的 tau 寡聚物。
The pathological aggregation of the tau protein is a common characteristic of many neurodegenerative diseases. There is strong interest in characterizing the potentially toxic nature of tau oligomers. These nonfibrillar, soluble multimers appear to be more toxic than neurofibrillary tangles made up of filamentous tau. However, reliable production, purification, and verification of tau oligomers can provide certain challenges. Here, we provide a series of methods that address these issues. First, recombinant tau is produced using Escherichia coli, purified through affinity, size-exclusion, and anion-exchange chromatography steps and quantified using an SDS Lowry protein quantitation assay. Aggregation of tau is induced using arachidonic acid, and oligomers are purified by centrifugation over a sucrose step gradient. Finally, we describe a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay that utilizes the tau oligomerspecific TOC1 antibody to confirm the presence of oligomeric tau. Together, these steps provide a very simple and reliable method for producing tau oligomers that can be used in downstream applications.
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DOI：
10.3233/jad-131235
发表时间：
2013
期刊：
Journal of Alzheimer's disease : JAD
影响因子：
--
作者：
Ward SM;Himmelstein DS;Lancia JK;Fu Y;Patterson KR;Binder LI
通讯作者：
Binder LI
影响因子：
6.1
作者：
Combs B;Hamel C;Kanaan NM
通讯作者：
Kanaan NM
影响因子：
3.9
作者：
Ward SM;Himmelstein DS;Lancia JK;Binder LI
通讯作者：
Binder LI
影响因子：
2.9
作者：
Combs B;Gamblin TC
通讯作者：
Gamblin TC
影响因子：
7.1
作者：
Gerson JE;Sengupta U;Lasagna-Reeves CA;Guerrero-Muñoz MJ;Troncoso J;Kayed R
通讯作者：
Kayed R